各类生物制品的分离纯化方法—培训课件.ppt

糖的分类： 按分子组成可分为 单糖 双糖 多糖 葡萄糖、果糖 乳糖、蔗糖、麦芽糖 淀粉、纤维素、糖原 （一）单糖及其衍生物的制备 1.提取：单糖易溶于冷水和温乙醇中，可用水及50%乙醇提取， 2.提纯：用醋酸铅盐析除去蛋白质杂质。 （二）多糖的分离与纯化 1.提取： （1）难溶于水、可溶于稀碱液者：碱提醇沉。 （2）易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者：热水提取，离心去除杂蛋白，再加乙醇沉淀得多糖。 （3）粘多糖的提取：因大部分多糖与蛋白质结合，因此需要先酶解或碱解去蛋白，再用水或盐溶液提取，用乙醇沉淀得多糖。 2.纯化 醇沉完的多糖仍有少量的蛋白质，和小分子杂质，去掉杂质蛋白质的方法有等电点沉淀法、加热变性法等；去掉小分子杂质最常用的方法是透析和超滤法，特别是超滤适合于大规模生产。 * 复习： 生物制品：生物制品系指以微生物、寄生虫、动物毒素、生物组织作为起始材料，采用生物学工艺或分离纯化技术制备，并以生物学技术和分析技术控制中间产物和成品质量制成的生物活性制剂。包括疫（菌）苗、毒素、类毒素、免疫血清、血液制品、免疫球胆白、抗原、变态反应原、细胞因子、激素、酶、发酵产品、单克隆抗体、DNA重组产品、体外免疫诊断试剂等，供某些疾病的预防、治疗和诊断用。 第二节 各类生物制品的分离纯化方法 一、蛋白质类制品的分离纯化 概述 蛋白质（protein）是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16.3%，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.8kg。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。 蛋白质的存在 广泛存在于生物体内：肌肉、皮肤、发、毛、蹄、角 ——主要成分都是蛋白质 蛋白质是组成细胞的基础物质构成人体的物质基础 植物种子、酶、激素、血红蛋白、细菌、病毒、抗体 ——都含蛋白质 1.根据分子形状和大小不同进行分离：如离心、超滤 2.根据分子电离性质（即带电性）的差异进行分离：如离子交换法、等电点沉淀法（即酸沉、碱沉） （一）分离纯化蛋白质的主要原理是： 3.根据分子极性大小及溶解度不同进行分离：如有机溶剂分级沉淀法（即醇沉）、盐析法。 4.根据物质吸附性质的不同进行分离：如吸附层析法。 5.根据配体特异性进行分离：如亲和层析。 （二）分离纯化常用方法 1.有机溶剂沉淀法（醇沉）： 原理：在溶液中，生物大分子自身所带的电荷能与水相互作用，在大分子表面形成水化膜，保证了生物活性物质的稳定性。但在水溶液中加入有机溶剂（如乙醇）后，有机溶剂会破坏大分子表面的水化膜，另外，加入有机溶剂会使溶液的极性减小，生物大分子在溶液中的溶解度就会降低，从而产生沉淀，这样目的物就从水溶液中沉淀而分离了出来。 有机溶剂的选择：有机溶剂沉淀法常用的有机溶剂为乙醇，因为乙醇在水中的溶解度大，毒性小，操作方便。用乙醇去沉淀生物大分子就是我们常说的醇沉。 例如应用乙醇分离血浆蛋白，控制乙醇浓度在8%时得到血纤蛋白原，乙醇浓度在25%时得到丙种球蛋白，乙醇浓度在40%时得到α、β球蛋白。 2.等电点沉淀法（酸沉、碱沉） 原理：多数的生物活性物质都是带电物质，都有自己的等电点，这些带电基团所带电荷的数量与PH密切相关。当溶液的PH大于生物大分子的等电点时，该物质带负电荷；当溶液的PH小于物质的等电点时，该物质带正电荷，当溶液的PH等于物质的等电点时，该物质的净电荷为零，此时的生物大分子溶解度最低，会聚集到一起形成沉淀而从溶液中析出。 方法：溶液的PH达到目的物的等电点时，目的物就会沉淀分离，所以向含有生物活性成分的溶液中加入酸或碱，来调节溶液的PH，使溶液的酸碱度达到工艺要求，就能使目的物沉淀而分离出来。这就是平时常说的酸沉与碱沉。