液相色谱仪检测土霉素、四环素、金霉素.pdfVIP

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2017-06-16 发布于河南
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液相色谱仪检测土霉素、四环素、金霉素

应对中华人民共和国国务院令第609号《饲料和饲料添加剂管理条例》液相色谱仪检测举例用LC-5500液相色谱仪检测土霉素、四环素、金霉素 1.1.1 仪器 LC5500高效液相色谱仪；溶剂过滤器；回旋振荡器；离心机。 1.1 仪器条件检测器：紫外可见检测器；检测波长：355nm；色谱柱：C18柱 4.6mm*250mm；流动相：乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）=25＋75；流速：1mL/min；柱温：室温；进样量：20μL。根据GB/T 5009.116-2003畜、禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定（高效液相色谱法）的要求，色谱柱应为ODS-C18（5μm）6.2mm*150mm，流动相乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）＝35＋ 65，由于我们试验所用色谱柱为4.6mm*250mm，所以经过试验得出最好用乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）＝25＋75的流动相，这样既可以在较短的时间内完成一次检测，又可以得到很好的分离，如图1 所示。图1 混合标样色谱图高效液相色谱法检测饲料中的氨基酸 1.1 仪器及试剂 1.1.1 试剂及试剂的配制 1.1.1.1 乙腈（色谱纯）； 1.1.1.2 水（超纯水）； 1.1.1.3 醋酸钠（分析纯）； 1.1.1.4 冰乙酸（分析纯）； 1.1.1.5 叠氮化钠（分析纯）； 1.1.1.6 N，N-二甲基甲酰胺（分析纯）； 1.1.1.7 碳酸氢钠（优级纯）； 1.1.1.8 磷酸二氢钾（优级纯）； 1.1.1.9 氢氧化钠（优级纯）； 1.1.1.10 色氨酸标样（中国标准物质中心）； 1.1.1.11 17种氨基酸混合标样（中国标准物质中心，混合标样中17种氨基酸的浓度见表一）；表一十七种氨基酸标样中各氨基酸浓度浓度浓度中文名称简称分子量（μmol/mL）（mg/100mL）天冬氨酸 Asp 133.1 2 26.62 谷氨酸 Glu 147.1 2 29.42 丝氨酸 Ser 105.1 2 21.02 精氨酸 Arg 174.2 2 34.84 甘氨酸 Gly 75.1 2 15.01 苏氨酸 Thr 119.1 2 23.82 脯氨酸 Pro 115.1 4 46.05 丙氨酸 Ala 89.1 2 17.82 缬氨酸 Val 117.1 2 23.44 蛋氨酸 Met