犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定.pdfVIP

畜牧兽医学报, 1998, 29 (2) , 151154 A c ta V e ter ina r ia e t Z ootech n ica S in ica 犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定 田克恭　遇秀玲　吴　娜　隋丽华 任晓明　李俊梅　刘永梅　渠川玫 (军事医学科学院实验动物中心, 北京10007 1) 　　摘　要　从病死犬肺、肝和淋巴结分离到2株 CDV , CDV 93039和 CDV 9304 1。消除小牛血清中 的干扰因素和33 ℃培养是分离成功的主要因素。两株病毒均在V ero 细胞生长 良好, 传2～ 4代毒力 - 6. 50 - 6. 77 稳定, CPE 产生明显, TC ID 50 为10 ～ 10 , 明显高于国内外野毒株和弱毒株的毒力效价。人工 感染犬死亡率较高, 表明该分离株致病力较强, 作者推测我国犬群可能存在 CDV 强毒变异株。 　　关键词　犬瘟热病毒, 分离, 鉴定 犬瘟热是由犬瘟热病毒( , ) 引起的犬的一种高度接触传染性 Can in e D istem p er V iru s CDV [ 1 ] 疾病。六十年代我国部分省市的毛皮动物和犬群中时有发生, 并逐渐在全国范围内流行 。七 十年代末, 先后从国外进 口的CDV 弱毒疫苗中分离到多株疫苗株, 并应用于犬及毛皮动物, [2 ] 对该病的预防起到了积极作用 。近年来, 不仅病犬数量有所增加, 而且临床表现也有所不同。 分析原因, 除母源抗体干扰, 疫苗效价低及使用不当外, 犬群中是否出现了CDV 强毒变异株 急待于研究证实。1993年我们采用BA 法证实病犬多脏器组织中存在CDV [3 ] 。本实验取这些 病犬脏器组织接种V ero 细胞, 分离到2株CDV 强毒。 1　材料与方法 11　材料 111　V ero 细胞及培养: 卫生部药品生物制品所提供。营养液为10% 小牛血清DM EM , pH 7. 2。维持液为2% 小牛血清DM EM 。 112　CDV 阳性血清: 日本北海道大学惠赠。 113　动物: 3 日龄健康幼犬7 只, 体重2 5～ 4 0k g只, 均未注射任何疫苗。 114　病料: 临床疑似犬瘟热的病死犬, 经BA 法确诊为CDV 阳性者, 取其肺、肝和淋巴结分 离病毒。病犬编号分别为93039、9304 1和93043。 12　方法 12 1　病毒分离 12 11　病料处理: 分别取上述病料, 1 5加入无血清DM EM 研磨, 离心取上清, 抗生素除 菌。菌检阴性者, - 20 ℃保存, 以备病毒分离用。 12 12　小牛血清处理: 无血清DM EM 洗涤V ero 细胞2 次, 加入培养液12量的小牛血清, 收稿 日期 152 畜　牧　兽　医　学　报 29卷 37 ℃吸附1h , 吸附后的血清分装, - 20 ℃保存备用。 12 13　病毒分离: 将病料按培养量的110接种V ero 细胞, 33 ℃吸附1h , 加入维持液继续培 养, 逐 日观察细胞病变(CP E ) , 待 CP E 达80% 时收毒, - 20 ℃20 ℃冻融3次, 继续传代。12 2 　电镜观察: 刮取接种CDV 的V ero 细胞, 离心弃上清, 固定、切片、染色