分子佐剂鞭毛素对弓形虫SAG1蛋白抗体应答的影响.PDFVIP

福建农林大学学报(自然科学版) 第４６卷 第３期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ) ２０１７年５月 分子佐剂鞭毛素对弓形虫ＳＡＧ１ 蛋白抗体应答的影响 黄驹辉ꎬ龚丽贞ꎬ唐静静ꎬ黄志坚ꎬ殷光文 (福建农林大学动物科学学院/ 福建省动物药物工程实验室ꎬ福建福州３５０００２) 摘要:将沙门氏菌鞭毛素和弓形虫免疫优势表面抗原１(ＳＡＧ１)融合表达ꎬ研究其在小鼠上激发的体液免疫应答.首先ꎬ采用 ＰＣＲ扩增ＳＡＧ１片段.其次ꎬ将 ＳＡＧ１连接到原核表达载体ｐＥＴ￣２８ａ 中构建表达质粒ｐＥＴ￣２８ａ￣ＳＡＧ１ꎻ连接到实验室已有的 ｐＥＴ￣２８ａ鞭毛素质粒中构建表达质粒ｐＥＴ￣２８ａ￣Ｆ￣ＳＡＧ１ꎻ质粒转化至大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)菌株中并进行表达.将纯化后的蛋 白免疫小鼠ꎬ每隔２周免疫一次ꎬ共免疫３次ꎬ第３次免疫后 １５ ｄ取小鼠血清.最后ꎬ采用蛋白印迹检测蛋白的大小ꎻ用酶联 免疫吸附方法检测血清中多克隆抗体的效价.结果表明ꎬ诱导出的ＳＡＧ１蛋白大小为３０ ｋｕꎬＦ￣ＳＡＧ１大小为７０ ｋｕ.酶联免疫 吸附方法检测的Ｄ 均为阴性对照的两倍ꎬ表明该多克隆抗体具有较高效价.可见ꎬ鞭毛素可以作为分子佐剂促进弓形虫 ４５０ ｎｍ 亚单位疫苗的体液免疫应答. 关键词:弓形虫ꎻ表面抗原 １(ＳＡＧ１)ꎻ鞭毛素ꎻ体液免疫 中图分类号:Ｓ８５２.４ 文献标识码:Ａ 文章编号:１６７１￣５４７０(２０１７)０３￣０３１８￣０５ ＤＯＩ:１０.１３３２３/ ｊ.ｃｎｋｉ.ｊ.ｆａｆｕ(ｎａｔ.ｓｃｉ.).２０１７.０３.０１４ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｄｊｕｖａｎｔ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｏｎ ｔｈｅ ｈｕｍｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｏｆ Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｓｕｂｕｎｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ ＨＵＡＮＧＪｕｈｕｉꎬＧＯＮＧ ＬｉｚｈｅｎꎬＴＡＮＧＪｉｎｇｊｉｎｇꎬＨＵＡＮＧＺｈｉｊｉａｎꎬＹＩＮ Ｇｕａｎｇｗｅｎ (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ/ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓꎬＦｕｊｉａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＦｕｚｈｏｕꎬＦｕｊｉａｎ ３５０００２ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｆｌａｇｅｌｌｉｎꎬａ ｌｉｇａｎｄｆｏｒ ＴＬＲ５ꎬｃａｎ ｂｅ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ｆｏｒ ｖａｃｃｉｎｅ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬｗｅ ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｔｈｅ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ａｎｄ Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ ｉｍｍｕｎｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ａｎｔｉｇｅｎ ＳＡＧ１ (ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ １)ꎬｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ＳＡＧ１ ａｎｄ ａｄｊｕｖａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｙ ｏｆ ｆｌａｇｅｌｌｉｎ ｆｏｒ ＳＡＧ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ. ＳＡＧ１ｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ ＰＣＲꎬａｎｄｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ ｐＥＴ￣２８ａ￣ＳＡＧ１. Ｔｈｅｎ ＳＡＧ１ｗａｓ ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｉｎｔｏ ｐＥＴ￣２８ａ￣Ｆ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ ｐＥＴ￣２８ａ￣Ｆ￣ ＳＡＧ１. Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙꎬｔｈｅｓｅ２ｐｌａｓｍｉｄｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏ ＢＬ２１(ＤＥ３)Ｅ.ｃｏｌｉａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄ.Ｐｕｒｉｆｉｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｉ