槐树植物中药生物碱抗肿瘤作用机制研究.pdfVIP

Anti-tumorEffectsofAlkaloids fromTCMSophoraPlants Ze Lin Submittedin Partial Fulfillment oftheRequirementsforthe DegreeofMasterofMedical Science Supervisor Prof. JiKai Jiang Department ofPharmaceutical Chemistry May,2011 - III - - IV- 摘 要 摘 要 摘摘 要要 近三十年来，人们越来越重视槐属植物中药所含有的喹诺里西啶类生物碱抗肿瘤作用 研究。常用的槐属植物中药有苦参、山豆根和苦豆子等，它们均含有苦参碱型（苦参碱、 槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱）、苦豆碱型、鹰爪豆碱型、金雀花碱型等喹诺里西啶类生 物碱。目前苦参和山豆根常用于中医临床治疗肿瘤的验方，而苦参碱和槐定碱在我国西医 临床已用于肿瘤治疗。本文就目前市售的槐属植物中药提取的七种喹诺里西啶类生物碱对 我国高发的呼吸系统肿瘤细胞株、消化系统肿瘤细胞株和白血病细胞株的作用进行了观察 和探讨。 在实验过程中，我们首先采用高效液相色谱法对市售的六种槐属植物中药喹诺里西啶 类生物碱进行纯度测定，结果显示苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱、苦豆碱和金雀 花碱的纯度均大于96%；鹰爪豆碱由出售公司提供纯度鉴定，大于99%。然后使用MTT法 分别检测了七种生物碱对肺癌A549细胞株、肝癌HepG2细胞株、食管癌EC109细胞株和三 种白血病细胞株K562、HL-60和U937增殖活性的影响。结果显示苦豆碱的抑癌效果最好， 尤其是对白血病细胞HL-60的增殖抑制作用非常明显，呈剂量和时间依赖性。经DNAladder 0.02mM HL-60 48 实验方法观察发现苦豆碱在 浓度下，作用 细胞 小时后，即可在琼脂糖凝胶 电泳后观察到DNAladder，提示苦豆碱诱导了HL-60细胞凋亡。Western blot结果显示，同 样实验条件下，凋亡蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly-ADP-ribose polymerase，PARP） 发生剪切，进一步证明苦豆碱可引起HL-60细胞凋亡。 我们还利用吖啶橙染色法观察到0.05mM苦豆碱作用HL-60细胞18小时后，细胞发生自 噬现象，且发现细胞所产生的自噬程度与苦豆碱有明显的剂量依赖性。 综上，七种槐属植物中药喹诺里西啶类生物碱对上述肿瘤细胞株均有一定的增殖抑制 作用，其中苦豆碱抑制肿瘤增殖效果最佳，对白血病细胞株的作用效果好于肺癌、肝癌和 食管癌实体肿瘤细胞株，尤其对HL-60细胞株作用最敏感。氧化苦参碱仅能抑制肝癌HepG2 细胞株的增殖。 关键词：喹诺里西啶类生物碱；苦豆碱；肿瘤；凋亡；自噬 - V- Abstract Abstract AAbbssttrraacctt In recent thirty years, the quinolizidine alkaloids isolated from Traditional Chinese Medicine (TCM) genus Sophora have received more attention. The genus Sophora commonly used as T