姜黄素对大鼠重症急性胰腺炎防治作用的实验研究.pdfVIP

姜黄素对大鼠重症急性胰腺炎防治作用的实验研究 摘 要 目的:观察姜黄素对大鼠重症急性胰腺炎 (Severe acute panereatitis ，SAP) 干预后不同时间点的腹水量、血清淀粉酶(Amylase ，AMY) 、肿瘤坏死因子 (Tumor Necrosis Factor-，TNF-)、白介素-6(Interleukin-6，IL-6)水平的变 化;观察胰腺组织大体形态和病理改变、Toll 样受体 4(Toll like reeeptor4 ， TLR4)和核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)表达水的变化以探讨 TLR4- NF-κB 在 SAP 大鼠中的信号通路的转导机制，进一步揭示姜黄素在大鼠 SAP 中的防治作用。方法:SD 雌性大鼠 54 只，体重约 180-250g ，随机分为 正常组(N 组) 、模型组(M 组) 、姜黄素预处理组(C 组)，各组按照 3h、6h、 12h 分为 3 个亚组，每组 6 只。N 组采取开腹后不经胰胆管推注牛磺胆酸 钠而仅翻动十二指肠及胰腺组织后关腹;M 组用 5% 的牛磺胆酸钠按 1.0ml/kg 逆行胰胆管推注诱导 SAP;C 组造模前 2h 用姜黄素 100mg/Kg 于腹 腔注射；N 组和 M 组动物分别于术前 2 小时腹腔注射 40%丙二醇溶液 1ml/100g.分别于 3h、6h 、12h 三个时间点处死大鼠，测定腹水量；采用全 自动生化分析仪测定大鼠血清AMY ；ELISA 法检测血清TNF-、IL-6 、IL-10 的含量，光镜下观察胰腺组织病理改变，用免疫组化（Envision 二步法） 检测 TLR4 和 NF-κB 蛋白的表达水平。所有结果均用 SAS 8.0 软件分析。 结果：①血清 AMY ：N 组 AMY 水平较低，M 组于造模后 3h 开始升高， 随时间而递增，以 6h 升高为著。M 组血清 AMY 较 N 组、C 组明显升高(P ＜0.01，P ＜0.05) ；②M 组、C 组与 N 组相比血清 IL-6、TNF-均明显升 高(P0.05) ，且以 6h 升高为明显; C 组 IL-6、TNF-水平较 M 组明显下降 （P ＜0.05 ）。③胰腺组织的病理学改变及评分：N 组胰腺组织病理学改变 2 未见明显异常，仅见轻微充血水肿，个别炎性细胞浸润。M 组各时间点胰 腺小叶结构不均，小叶间隔明显增大，腺体组织充血、水肿、出血、坏死、 炎性细胞浸润均清晰可见，胰管上皮细胞脱落及嗜酸性变，小叶缺失。随 着时间的推移，炎症加重，以 12h 时最明显;C 组胰腺组织在充血、坏死及 炎症细胞浸润方面均较 M 组为轻，但仍可见坏死灶、胰管上皮的脱落及嗜 酸性变。C 组与 M 组同时间点相比病变程度减轻。N 组的 Schimdt 评分值 各时间点均无显著性差异(P0.05) 。M 组、C 组各时间点的 Schimdt 评分 均明显高于 N 组(P0.01) 。随着时间的推移，M 组的评分值逐渐上升，12h 时达高峰;C 组各时间点的评分值明显低于 M 组 (P0.05) 。④胰腺组织 TLR4 、NF-κB 的表达：N 组的 TLR4 、NF-κB 蛋白表达活性很低，M 组大 鼠各时间点的胰腺组织NF-κB 、TLR4 的阳性表达水平较N 组和 C 组明显 增加（P ＜0.05 ），且随时间的延长而增加，造模成功后 3h 内即有TLR4 蛋 白表达，在 12h 处于高峰。C 组各时间点胰腺组织 NF-κB 、TLR4 蛋白的 阳性表达较 M 组有所下降（P ＜0.05 ）；而TLR4 与 NF-κB 的表达相平行。 C 组各时间点阳性细胞表达明显低于 M 组(P ＜0.05)，且各组NF-κB 、TLR4 蛋白水平的变化与形态学改变基本一致。结论:1.本实验采用逆行胰胆管推 注牛磺胆酸钠成功构建了 SAP 大鼠模型。 2.TLR4 、NF-κB 在大鼠重