用于细胞内活性氧自由基检测的远可见、近红外荧光探针的设计合成及应用研究.pdfVIP

等优点，可实现虻’的可视化示踪，对于活性氧的研究具有重要意义。 3、 设计合成了一种有效用于水相中检测超氧阴离子自由基的新型红色荧光探针 一双(--苯基次膦酰基)-5(6)一羧基萘荧光素，用元素分析、红外、核磁共 振等手段对探针结构进行了表征，建立了测定水相中02’的普通荧光法。探针试 剂本身无荧光，经02。亲核性水解次膦酯产生强荧光产物-5(6)一羧基萘荧光 素，激发和发射波长分别位于588nm和667nm。该探针高选择性捕获02．j同倍 检出限为0．25nM，具有良好的灵敏度 4、基于H202能特异性催化水解磺酸酯，我们创新性地设计合成了两种新型近红 外荧光探针一双(对甲苯磺酰基)萘荧光素(NIDS．1)和双(全氟辛烷磺酰基) 萘荧光素(卜IFDs-2)，用于细胞内过氧化氢的检测。探针试剂本身没有荧光，与 过氧化氢反应后产生荧光产物萘荧光素，激发和发射波长分别为602／692衄，位 于近红外区，有效避免了细胞自发荧光的背景干扰。实验表明，脂溶性探针NFDS．1 具有良好的膜穿透性，可选择性捕获细胞内的过氧化氢，并且可以对细胞内纳摩 尔级过氧化氢含量的变化产生响应。尽管NFDS．1的水溶性欠佳，但在二甲基亚 砜促溶下，仍然可以有效进行水相中过氧化氢的检测。方法的线性范围为 6．0x109．-．4，0×10-6tool l～，检测限为81．5 pM。研究结果将为植物体内过氧化氢的检 测及信号转导研究提供实用可靠的探针及实验方法。 5、本文设计合成了新型绿色荧光探针一双(对甲苯磺酸酯基)荧光素(FS一1)和双 (对甲苯磺酸酯基一二氯荧光素(FS-2)，用于检测细胞内过氧化氢。检测原理 是基于H202能特异性催化水解磺酸酯，给出荧光产物荧光素。实验表明，探针 Fs一1和FS-2在模拟生物体系中检测过氧化氢，具有良好的选择性和灵敏度，且 线性范围宽。其它种类活性氧和一些生物体内存在的还原性化合物，包括02。，OH， NO，ONOO‘，对苯二酚，谷胱甘肽和酯酶等基本不干扰。细胞成像实验表明，探 针Fs—l和FS一2用于PMA刺激或外加不同浓度H202孵育的小鼠腹膜巨噬细胞均 呈现明亮的绿色荧光，且能对细胞内微摩尔级H202浓度变化产生响应。证明两探 针均具有良好的膜渗透性、高的选择性及良好的灵敏度。 6、利用双(对甲苯磺酸酯基)萘荧光素及双(二苯基次膦酰基)荧光素联合测定 肺纤维化鼠的胸腔灌洗液的上清液及巨噬细胞内过氧化氢和超氧阴离子自由基的 量，以及肺组织细胞中该两种自由基的同时定量，定性给出了肺纤维化程度与自 由基量的关系。 关键词：超氧阴离子自由基，过氧化氢，近红外荧光探针，细胞成像，同时测定． Abstract The ofvariousreactive havebeen levels oxygenspecies(ROS)inorganism associatedwith and and offi-∞ biologicphysiology quantifying pathology．Recognition radicalsRrea to functions．Inthis ROS dissertation，we premisestudy biological and aseriesoffluorescein-and designedsynthesized for and anion probesdetectingimagingsuperoxideradical(02一)andperoxidehydrogen cellsor 0nanonredox living aqueoussolutions，based