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A型肉毒毒素受体结合区Hc在重组SFV复制子载体中的表达
生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, January 25; 24(1): 124-129 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved. 研究简报 A Hc SFV 余云舟, 孙志伟, 王双, 俞炜源 , 100071 : 为了在哺乳动物细胞中表达A 型肉毒毒素 Hc 抗原, 构建了含 A 型肉毒毒素受体结合区Hc 基因的基于 RNA 和DNA 的重组Semliki 森林病毒(Semliki forest virus, SFV)复制子表达载体。RNA 和DNA 复制子载体转染BHK21 细胞 后, 经间接免疫荧光、Western 印迹和ELISA 检测, 结果表明非分泌型和分泌型的Hc 抗原在细胞中都得到了有效地表 达; 而且复制子表达载体与辅助病毒载体共转染均可制备高滴度的重组病毒颗粒, 该重组病毒颗粒感染细胞后, 也都 能表达Hc 抗原。以上结果表明, 基于RNA 和DNA 的重组SFV 复制子表达载体在细胞中均可有效地表达Hc 抗原和制 备具有感染能力并能表达Hc 抗原的重组病毒颗粒。基于RNA 和DNA 的重组SFV 复制子表达载体的构建和含A 型肉 毒毒素受体结合区Hc 基因的重组病毒颗粒的获得, 为进一步观察SFV 复制子疫苗的免疫原性奠定了基础, 从而为A 型 肉毒毒素新型疫苗的研制提供了新途经。 : semliki 森林病毒, 复制子, A 型肉毒毒素, 受体结合区Hc, 重组病毒颗粒 Expression of the Hc Fragment of Clostridium botulinum Neurotoxin Serotype A in Mammalian Cells with Recombinant Semliki Forest Virus Expression System Yunzhou Yu, Zhiwei Sun, Shuang Wang, and Weiyuan Yu Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100071, China Abstract: To produce the C-terminal fragment of heavy-chain receptor (Hc) of the Clostridium botulinum neurotoxin serotype A (BoNT/A) in mammalian cells, we cloned the Hc gene from BoNT/A into the RNA and DNA-based Semliki Forest virus (SFV) rep- licon expression vectors, resulting in recombinant replicon expression vectors pSMHc, pSMSHc, pSCARHc, and pSCARSHc. Effec- tive expression of non-secreted and secreted antigen Hc were confirmed by indirect imumofluorescence (IF), Western
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