不同的冻存方法对1型糖尿病患者胰岛抗原特异性T细胞反应概要.PDFVIP

中南大学学报（医学版） 2013, 38(2) ; J Cent South Univ (Med Sci) 169 DOI:10.3969/j.issn.1672-7347.2013.02.010 /xbwk/fileup/PDF/201302169.pdf 不同的冻存方法对 1 型糖尿病患者胰岛抗原特异性 T 细胞反应的影响 杨琳，超晨，唐维，王臻，俞海波，崔秋燕，周智广 ( 中南大学湘雅二医院内分泌科，中南大学糖尿病中心，中南大学代谢内分泌研究所， 糖尿病免疫学教育部重点实验室，长沙 410011) ( [ 摘要 ] 目的：明确何种冻存方案更利 于保持 1 型糖尿病患者 的外周血单个核细胞 peripheral blood mononuclear cells ，PBMCs) 对胰岛抗原特异性 的 T 细胞反应 ，更接近于新鲜细胞 的状态。方法：本研究系国际免疫学协会 -T 细胞 工作组 (IDS-TCW ) 牵头的国际标准化研究 Freezing Study I 。中南大学糖尿病中心选取 5 例新发的 T 1D 患者和年龄、性 别相匹配的 5 例正常对照。所有对象新鲜分离 的 PBMCs 分为 3 份 ，一份进行亚型细胞 的流式细胞分析和酶联免疫斑 点实验 (enzyme linked immunospot assay ，ELISPOT) ，另两等份分别采用低温和室温冻存方案冻存 ；1 个月后分别按低温 和室温方案复苏 ，以台盼蓝染色判定细胞活力 ；并行流式细胞分析术和 ELISPOT 检测 。ELISPOT 中 4 种抗原 [ 包括 人 GAD65、内对照、Pediacel ( 巴斯德五合一疫苗 ) 和 PMA ] 均 由 IDS-TCW 中心化实验室盲法标记 ，盲法测定 。以新鲜 PBMCs 为参照 ，比较两种冻存方案下 PBMCs 的复苏率和活力、各亚型细胞 比例和 ELISPOT 检测结果 。结果：1) 室温 冻存下 的 PBMCs 复苏率和细胞活力均略高于低温冻存方案 ，但二者差异无统计学意义 ( 分别为 61.2% vs 60.1% ，77.5% P ± ± vs 74.9%； 0.05)；2) 相 比新鲜细胞 ，两种冻存方案均会造成一定程度的单核细胞的损失 [(3.2 1.1)% ( 低温 ) 和 (3.0 0.9)% ± P + + P ( 室温 ) vs (7.0 1.1)% ( 新鲜 )； 0.05]；而 CD4 T ，CD8 T ，B 细胞 ，NK 细胞和 NKT 细胞 比例均无明显变化 ( 0.05)；3) ELISPOT 检测结果显示：对多克隆刺激物 PMA 诱发的 T 细胞分泌 IFN-γ 的反应 ，在新鲜和冻存复苏细胞间无明显差异； 记忆性抗原 Pediacel 和胰岛抗原 GAD65 刺激下的特异性 T 细胞反应在冻存复苏细胞均明显差于新鲜细胞 ，T 1D 患者新 鲜细胞 的 GAD 特异性 T 细胞反应 的 SI 为 5.1，均高于低温 (1.3) 和室温 (1.4) 冻存复苏的刺激指数 (SI)( 均 P0.05) ；而