jj选修1——微生物的培养与应用.pptVIP

专题2 微生物的培养与应用 传统发酵技术 实验室培养微生物的要求 为培养的微生物提供合适的营养和环境条件； 确保无为他微生物的混入。 课题1 微生物的实验室培养 （一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1.培养基的类型和用途 （1）按物理状态来分：固体培养基和液体培养基 （2）按功能来分：选择培养基和鉴别培养基 （3）按成分来分：天然培养基和合成培养基 2.微生物所需营养物质和生存的环境 （二）无菌技术——防止外来杂菌的污染 实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1. 计算：100mL的使用量 2. 称量 按比例称取各种物质 注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 3.溶化： 先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。 加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解， 再加入琼脂，加热搅拌，待溶解后， 加蒸馏水定溶至100 mL。 4.灭菌 将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），放到高压灭菌锅内灭菌； 培养皿（用几层报纸包好）放入干热灭菌箱内灭菌。 5.倒平板：待培养基冷却到50℃左右时倒平板 平板划线法 平板划线法: 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 稀释涂布平板法 稀释涂布平板法 是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。 系列稀释操作 系列稀释操作 系列稀释操作 系列稀释操作 涂布平板操作 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课题3 分解纤维素的微生物的分离 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 问题讨论 菌种的保存 1.临时保藏： 接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2.长期保存： 甘油管藏法 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌能利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 + H2O CO2 + 2NH3 细菌脲酶 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 1、实例： PCR技术 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制(PCR)的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 ㈠.筛选菌株 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 举一反三 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物 1、利用尿素作为唯一氮源的培养基 分离出的微生物 ①只是一种细菌吗？ ②都是能分解尿素的微生物吗？