内生真菌对大花红景天中红景天苷合成代谢途径中关键酶基因表达的影响.pdf

·1920 · 药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2016，51(12)：1920—1925 内生真菌对大花红景天中红景天苷合成代谢途径 中 关键酶基因表达的影响 王梦亮 ，王雅楠 1,27崔晋龙 ，王俊宏 (山iN；k~-1．应用化学研究所，2．生物技术研究所，山西 太原 030006) 摘要：以活性内生真菌 ZPRa．R．1促进大花红景天积累红景天苷为基础，筛选红景天苷合成代谢途径中管家 基因的稳定性，建立以双 内参基因评价红景天苷合成代谢中关键酶基因表达规律的方法。通过实时荧光定量 PCR，以及 geNorm、NormFinder、BestKeeper等软件分析管家基因的稳定性，利用2。△△C的方法分析关键酶基因 的相对表达量。结果表明，真菌ZPRa．R．1与大花红景天互作条件下，甘油醛磷酸脱氢酶 (GAPDH)基因的表达 最稳定，其次是 PCS；最精确的校准误差方法为双内参基因组合；真菌 ZPRa—R—l对红景天苷合成代谢关键酶基 因及其表达产物产生规律性影响：互作 8天时，尿苷一磷酸葡萄糖转移酶 (UDPGT)基因的相对表达量达到对照 组的 17．1倍：互作 1O天时，PAL相对表达活性达到峰值，为对照组的4．9倍；互作 12天时，TyDC基因相对表达 量达到最大，为对照组的2．8倍；而对 TAT表达量影响较小。同时，关键酶基因表达的变化与终产物红景天苷呈 正相关关系。 关键词：大花红景天；桂皮酸代谢途径；内参基因；关键酶基因；实时荧光定量PCR 中图分类号：R931 文献标识码：A 文章编号：0513-4870(2016)12—1920—06 Effectofendophyticfungusonexpressionofkeyenzymegenes inpathwayofsalidrosidebiosynthesisinRhodiolacrenulata WANG M eng—liang ，WANG Ya—nan，，CUIJin—long ，WANG Jun—hong f』．1nsitituteofAppliedChemistry,2．InsitituteofBiotechnology,ShanxiUniversity,Taiyuan030006,China) Abstract：OnestrainofendophyticfungusZPRa—R·1wasobtainedforthecapacityofpromotingproduction ofsalidrosideinRhodiolacrenulata． Toexplainthemechanism ofsalidrosidebiosynthesisinhostplant，eight housekeeping geneswere evaluated，and theevaluationmethodwascreatedofrthe expression activitiesof fourkeyenzymegenes 三 (phenylalanineammonia-lyase)，TyDC (tyrosinedecarboxylase)， (tyrosine transaminase)，【，DPG (UDP—glucosyltransferase)referenceddoublereferencegenesinbiosynthesispathway ofsalidroside in R．crenulata． Stabilitiesofhousekeeping geneswere confirmedby real—timefluorescent quantitativePCRtechnologyandthreesoftwaresincludinggeNorm，NormFinderandBestKeeper，thenrelative expressionsofkeyenzymegeneswereanalysizedbythe2 method． Theresultsshowedthatthemost st