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核苷酸的纸电泳
现代生化技术实验论文 作者： 学院专业： 核苷酸的纸电泳摘要 纸电泳是在渗透了缓冲液的滤纸加上电场使物质移动的电泳法，即把样品以带状加在作为支持物的滤纸内来检测其移动和分离的方法。常用以分离性质相似的物质，如各种氨基酸和核苷酸的分离等。本实验用纸电泳法分离核苷酸，向阳极移动速度按下列顺序排列：UMP﹥AMP。电泳后的图谱，经紫外光照射，可看到暗紫色的各种核苷酸斑点。与标准核苷酸电泳图谱作对照，可鉴别是何种核苷酸。关键词 纸电泳、滤纸、核苷酸 正文 实验方法和过程 1 材料与试剂的准备 材料电泳仪? 电泳槽（水平式）? 紫外检测仪? 电吹风 电泳滤纸： 新华1号滤纸条：12cm×30cm ???????????毛细管 喷雾器 样品液：纯牛奶?????铅笔 尺1．2 试剂的制备 ???? ?0.5％标准核苷酸溶液：准确称取AMP，UMP等核苷酸各50mg， 溶于少许0.01mol/L盐酸溶液中，转入10ml容量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液定容至刻度。 pH 3.5,0.05mol/L柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液：称取8.10g柠檬酸，3.35g柠檬酸钠，用蒸馏水溶解并定容至1000ml。操作方法2.1 滤纸准备：将新华1号滤纸裁成30cm长、12cm宽的纸条，在距离端6cm处画一基线。基线上每隔2cm画一点并在基线一端标示负号，在另一端标示正号。2.2 点样 ? 用毛细管依次将样品液点于记号处，并在两旁的点样点位置上分别点上核苷酸标准液。注意斑点直径勿超过2mm，每样点2～3次，每点一次用冷风吹干。 ??2. 3 电泳 将滤纸平整地放在电泳槽的滤纸架上，纸两端浸入电极缓冲液中。用滴管将电泳缓冲液（pH3.5）均匀地滴于纸上（点样处最后湿润）。 盖上电泳槽盖，接上电极，点样端接负极；接通电源，调电压至300V，室温通电2小时；电泳完毕后，关闭电源，取出滤纸，将其用冷风吹干。 ???2. 4 鉴定 在暗室条件下，将干滤纸置于紫外灯下(260nm)观察，用铅笔将各紫色斑点划出。并测定各斑点的迁移距离。与标准核苷酸斑点的所走距离比较，以确定样品中核苷酸的成分。实验结果(此处粘贴电泳的滤纸结果)研究讨论参考文献1 HYPERLINK /Periodical_spgykj200005034.aspx \o 该结果由/提供 \t _blank 香菇及其他食用菌中香菇嘌呤含量的检测 孙培龙 吴学谦 季培军 赵明珠 《食品工业科技》 2000 第5期 - 万方数据 2 HYPERLINK /qk/95680X/201001html \o 该结果由/提供 \t _blank 人端粒酶催化亚单位（hTERT）反义分子探针的制备与理化性质初步研究 王荣福 刘萌 张春丽 闫平 《核化学与放射化学》 2010 第1期 - 维普资讯网 3 HYPERLINK /view/90a6e7f8fab069dc502201cf \o 该结果由/download/default.aspx提供 \t _blank GL－7－ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达 杨蕴刘;恽定芳;关颖谦;彭惠林;陈剑民; - 知先信息
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