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双酶切和同源重组方法构建pMIR_reporter载体的比较
中 国 病 原 生 物 学 杂 志 年 月 第 卷第 期
２０１５ ６ １０ ６
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Ｊｏｕｒｎａｌｏ Ｐａｔｈｏ ｅｎＢｉｏｌｏ Ｊｕｎｅ２０１５ Ｖｏｌ．１０ Ｎｏ．６ · ·
４９５
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： ／ 论著
ＤＯＩ １０．１３３５０ ．ｃ ｂ．１５０６０４
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双酶切和同源重组方法构建 载体的比较
ＭＩＲ ｒｅｏｒｔｅｒ
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马凯 胡红霞 于婧 周丹 孙艳 马磊 沈波
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南京医科大学病原生物学系 江苏南京 ２１００２９
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摘要 目的 以 为载体骨架 通过双酶切方法和同源重组方法构建载体 比较两种不同载体构建方法
ＭＩＲ ｒｅｏｒｔｅｒ
ｐ － ｐ
的优缺点。 方法 双酶切方法使用 和 两种限制性内切酶分别酶切 和经 克隆后靶基
Ｈｉｎｄ Ｍｌｕ ＭＩＲ ｒｅｏｒｔｅｒ Ｔ Ａ
Ⅲ Ⅰ ｐ － ｐ －
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因ＰＣＲ片段 形成带有相同粘性末端的线性载体片段和 ＰＣＲ片段 然后利用 Ｔ４ＤＮＡ 连接酶连接 连接产物转化大肠
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埃希菌感受态细胞 转化菌涂布含氨苄青霉素的固体培养基平板进行阳性单克隆筛选并测序 同源重组方法利用同源
， ，
重组原理 通过重组酶将靶基因 片段和经 酶切 线性载体重组连接 连接产物转化入大肠埃
ＰＣＲ Ｈｉｎｄ ＭＩＲ ｒｅｏｒｔｅｒ
Ⅲ ｐ － ｐ
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