禽补体C3d增强新城疫病毒F基因核酸疫苗免疫效果的研究.pdfVIP

山东畜牧兽医 2017年第38卷 禽补体C3d增强新城疫病毒F基因核酸疫苗免疫效果的研究 夏庆祥沈美艳 李舫+ (山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061) 牛钟相+ (山东农业大学动物医学院山东泰安271018) 王晓艺 (山东省烟台市牟平区姜格庄街道兽医工作站) 摘要本文对禽C3d的分子结构，对抗原免疫原性的影响做了初步研究。结果表明，理论上本动物C3d的免疫增强 效果更好。 关键词C3dF基因核酸疫苗免疫原性 中图分类号：$818．9文献标识码：A 文章编号：1007．1733(2017)03．0004．02 补体系统的核心成分是C3蛋白，在补体反应的三条 途径中居于枢纽地，是宿主防御机制中的关键分子。C3d 是产生于补体激活过程中补体C3裂解后的一个片段。研 究发现C3d作为分子佐剂可以降低B细胞的活化阈，促进 抗原的加工和递呈，提高抗体水平【卜4】。补体裂解片段 C3d由于其分子中的分子内硫酯键和与CD21的结合位点 的存在．使其能够发挥分子佐剂的作用从而在抗原诱导 的体液免疫应答中发挥重要的调节作用。自Dempsy等通 过基因工程方法将鸡卵溶菌酶(henegglysozyme，HEL)分 别与小鼠C3d分子串联制备成融合蛋白免疫小鼠从而发现 C3d的分子佐剂作用以来，人们陆续克隆了鼠、羊、牛等 动物的C3d基因【5～”，用于基因疫苗的构建或表达融合蛋 白，来改进疫苗的免疫原性，以提高疫苗的抗体滴度、 亲和力和细胞免疫水平。虽然有报道C3d能在异源动物 中保持免疫佐剂活性，但异源C3d在应用过程中可能产生 抗C3d抗体或引起自身免疫从而降低其在疫苗中的免疫佐 剂作用，但理论上应用同源C3d可能避免这些缺陷而且可 能具有更高的生物学活性。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1试验动物商品绍兴麻鸭，购自山东省枣庄市苗 庄种鸭场；AA肉鸡，购自山东省畜禽疾病防治中心。 1．1．2 毒株和菌株：新城疫病毒F48E9株、大肠杆菌 45 4fl 1E jn j5 ：r| 5 0 E 0 BL2 ㈨一‘『ejfIdeSUb：ttUllOr]tj、1_．=_1 (Escherichia，E．coli1)，本研究室保存。 1．1．3 试剂和仪器pMDl8．T载体、限制性内切酶、 图3不同动物补体C3d基因进化树 T4DNA连接酶、AMV反转录试剂盒、Taq酶、dNTp等 2．2重组质粒的鉴定 pCR相关试剂，均购自TaKaRa公司；TrizolReagent，购 M1 2 3 0 自Invitrogen公司；凝胶回收试剂盒，购自OMEGA公司； 质粒小提试剂盒、无内毒素质粒大提试剂盒，购自 TIANGEN公司 1．2方法 1．2．1 C3d的克隆及鉴定分别取鸡和鸭的肝脏，提取肝 脏总RNA，RT-PCR扩增C3d基因，连接到T载体，转化 BL2I，测序。 1．2．2 P29串联体的构建参照楮新星【81等报道的策略， 项目基金：山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队建设项目(SDAIT一13—01l一05) +通讯作者 4 万方数据 !壁!Z生复兰塑!篁釜242期) 试验研究 2．3血凝抑制试验 血凝抑制是检测新城疫抗体的主要指标之一。在初 pCDNA．F．P29．40．5～2个滴度，连接P29串联体的基因疫苗 免后第7、14、21、28天分别采血分离血清，结果取平均 比单纯的F基