BCB和Zebularine对绵羊体细胞核移植胚胎发育效果的影响.pdfVIP

and 2017每第53卷第3期 繁骚生理。Reproducti011Physiology B 胚胎发育效果的影响 曹慧1，李俊杰m+，郝永兰1，刘爱菊1，李文瑞1，魏巧莉1，田树军1,2孙树春1’2 摘要：为探究亮甲酚蓝(BCB)染色选择的卵母细胞是否有利于体细胞核移植胚胎的体外发育，本实验将卵丘一卵 未经BCB处理的COCs作为对照组。然后将卵母细胞进行体外成熟，统计卵母细胞的成熟率。将成熟后的卵母细胞 进行体细胞核移植，其中，部分BCB+组卵母细胞所需的供体细胞利用Zebularine处理，统计体细胞核移植的卵裂率、 65．38％，53．52％， 桑椹胚率和囊胚率。结果表明：BCB+组卵母细胞的成熟率显著高于对照组和BCB一组(71．15％、，S PO．05)；BCB+组核移植胚胎的卵裂率(87．91％vs56．83％)、桑椹胚率(37．41％vs21．73％)和囊胚率(21．48％VS 83．23％)和囊胚率(21．48％VS 6．82％)均显著高于BCB一组(P0．05)；与对照组相比，BCB+组卵裂率(87．91％VS 著高于BCB+组、对照组和BCB一组(29．25％VS21．48％，14．89％，6．82％，PO．05)。 关键词：BCB染色；Zebularine；绵羊；体细胞核移植 中图分类号：S826．3 文献标识码：A 卵母细胞的质量直接影响着体细胞核移植效率， 现阶段卵母细胞大多来源于屠宰场卵巢，其质量和 种DNA甲基转移酶抑制剂，具有毒性低、稳定性强、 所处发育阶段差别较大。前期研究表明，使用亮甲 胞或重构胚，获得了理想的体细胞核移植效果[14-16]。 酚蓝(BrilliantBlue，BCB)对猪”】、牛【2】、山 Cresyl 羊纠、绵羊㈣、小鼠吲等动物卵母细胞进行染色，能 够筛选出具有更高发育潜能的卵母细胞。另有研究 植的研究未见报道，为优化绵羊体细胞核移植技术 表明，在哺乳动物体细胞核移植过程中，降低DNA 程序，本实验拟在前期研究的基础上，使用BCB染 甲基化水平有利于体细胞核移植重编程的进行16】。近 年来在小鼠P1、兔剐、牛H、猪呷1上的研究表明， 使用DNA甲基转移酶抑制剂处理供体细胞或重构 植胚胎发育效果的影响。 胚能够降低供体细胞或重构胚的DNA甲基化水平， 1材料与方法 收稿日期：2016-10—08；修回日期：2016—11—11 1．1 主要化学试剂 本实验所用试剂除非特殊说明 资助项目：河北省自然科学基金(C2014204119)；河北省高 mmol／L 外均购自Sigma公司。采卯液：TCMl99+5 等学校科学技术研究项目(ZD2014002) mmol／LHEPES+10mmol／LHEPES— NaHC03+10 作者简介：曹慧(1989一)，女，河北正定人，在读硕士研究生， Na+20mL／LFBS+O．04 主要从事动物繁殖与胚胎工程研究，E—mail：caohui8529@163． g／L肝素钠+o．05g／L青