实验九 细菌鉴定中生理生化反应.pptVIP

（八）细菌鉴定中常用的生理生化反应（实验24） 目的要求? 学习并掌握细菌分类鉴定中常用的 生理生化反应。 实验原理 同种的细菌具有相同或相近的表型特征（形态、生理特征、代谢产物等） 细菌的代谢与呼吸，主要取决于酶的催化作用，各种细菌具有不同的酶系统。 糖发酵试验 在肠道细菌的鉴定上尤为重要 细菌可发酵的基质 糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖） 醇（甘露醇） 糖苷（甘油） 发酵后产生的有机酸 乳酸、醋酸、丙酸等 发酵后产生的气体 甲烷、氢、二氧化碳等 1. 葡萄糖发酵试验2. 乳糖发酵试验 指示剂：溴甲酚紫（变色范围pH5.2-6.8, pH5.2黄色，pH6.8紫色） 安装倒立的杜氏小管（内充满液体） 3. 乙酰甲基甲醇试验（V.P.试验）4. 甲基红试验（M.R.试验） 细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。 细菌体内丙酮酸代谢途径的不同，可通过V.P. 和M.R. 这一对实验进行鉴别。 V.P.反应阳性途径： M.R.反应阳性途径 丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。酸的产生可加入指示剂甲基红（变色范围pH4.2-6.3,pH4.2红色，pH6.3黄色）显示。培养液由原来的黄色变为红色。 5. H2S产生试验 判断细菌是否能分解培养基中的含硫氨基酸。 6. 吲哚产生试验 判断细菌是否（含色氨酸酶）能利用色氨酸。 实验材料 1. 大肠杆菌 （Escherichia coli） 2. 枯草芽孢杆菌 （Bacillus subtilis) 3. 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 4. 普通变形杆菌(Proteus vulgaris) 实验方法与步骤 （一）液体培养基的制备与灭菌 1）糖发酵液体培养基： 葡萄糖/乳糖 1.0 g 蛋白胨 1.0 g NaCl 0.5 g H2O 100 mL 调pH 7.4，然后加1.6 % 溴甲酚紫乙醇溶液调至溶液呈浅紫色；装倒立的杜氏小管（装时不能有气泡） 0.05MPa压力（108.8℃），灭菌20 min V.P. / M.R.试验用培养基 2）葡萄糖蛋白胨培养基： 葡萄糖 0.5 g 蛋白胨 0.5 g K2HPO4 0.5 g H2O 100 mL pH 自然 ，溶液呈黄色 0.05MPa压力（108.8℃），灭菌20 min 产H2S试验用培养基 3）产硫化氢实验液体培养基 牛肉膏 0.5 g 蛋白胨 1.0 g NaCl 0.5 g 胱氨酸 0.01 g (用0.1M HCl配制1％胱氨酸母液1 mL) H2O 100 mL pH 7.4 ，0.05MPa压力（108.8℃），灭菌30 min 吲哚产生试验用培养基 4）胰蛋白胨水培养基： 胰蛋白胨 1.0 g （含有丰富的色氨酸，价格贵） H2O 100 mL pH 7.2-7.4， 0.05MPa压力（108.8℃），灭菌30 min （二）接种培养 （三）反应结果鉴定 葡萄糖/乳糖发酵试验，H2S产生试验 直接观察。 VP试验：去塞，加40％KOH 15滴，振荡，再加等量α－奈酚，振荡，37℃振荡培养30min，观察。 MR试验：加甲基红试剂2－3滴，观察。 吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。 教学内容 1、葡萄糖发酵 2、乳糖发酵 3、乙酰甲基甲醇试验（V.P.试验） 4、甲基红试验（M.R.试验） 5、 H2S产生试验 6、吲哚产生试验 实验报告及思考题 1、糖发酵试验中，所安装的杜氏小管起什么作用？ 2 、V.P.试验与M.R.试验的最初作用物以及最终产物有什么异同？为什么会出现最终产物的不同。 3、硫化氢及吲哚各是细菌分解哪一种氨基酸的产物？ * 不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和终产物也不一样。 细菌代谢类型的多样性，具体表现在生化反应多样性，因此在细菌分类鉴定中，常利用其生理生化反应作为重要依据。 pH5.2, 溶液由清亮紫色变为浑浊黄色 乳酸、醋酸、丙酸 葡萄糖/乳糖 甲烷、氢、二氧化碳 杜氏小管内有气泡，产气漂浮 1支/每组不接种 枯草杆菌，2支/每组 变