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马动脉炎病毒Eva Green荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用.pdf
第 36 卷第 12 期 中国预防兽医学报 Vo l. 36 ,No .l2 Dec. 2014 2014 年 12 月 Chinese Joumal of Preventive Veterinary Medicine doi: 10.3969/j .issn.l008-0589.2014.12.07 马动脉炎病毒 Eva Green 荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立及初步应用 胡月 1 气戚亭2 ，胡哲2 ，关平原 l\ 王晓钧 2 (1.内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室， 内蒙古呼和浩特 010018; 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒创新团队，黑龙江哈尔滨 150001) 摘 要:为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法，本研究设计了一对针对 EAV Buc严us 株ORF7 基因序 2 列的特异性引物，建立了检测 EAV 的 Eva Green 荧光定量 RT-PCR (qRT-PCR)方法。结果表明，该方法在 10 拷 15 贝 L~107 拷贝 /μL 范围内具有良好的线性关系;最低检出量为 10 TCID5(YmL病毒，敏感性为常规 RT-PCR 的 /μ 100 倍，与其他马常见病毒无交叉反应;纽内及组间重复性试验的变异系数均小于 2%，具有较好的重复性。此 方法进 外，采用该方法测定了 EAV Bucyrus 株及其拯救病毒 icEAV 感染RK.-13 细胞后的复制动态，并与 TCID so 3 33 行了比较。结果显示 icEAV 与其亲本病毒接种RK.-13 细胞后， 0 h 测定病毒 TCID 及拷贝数分别为 10 . so 465 到
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