实验二细菌的分离接种及理化因素影响要点.pptVIP

实验二 细菌的分离接种及理化因素的影响 实验目的 掌握培养基制备的基本过程 熟悉常用培养基的原理、种类及其用途 掌握细菌的分离接种方法 皮肤表面的细菌发布及消毒前后对比 紫外线对细菌的影响 药物对细菌的影响 实验内容 1、制备普通琼脂平板 2、细菌在平板上的接种方法及生长表现 3、细菌在液体中的接种方法（肉汤）及生长表现 4、细菌在半固体中的接种方法及生长表现 5、皮肤表面的细菌分布及消毒前后对比 6、紫外线对细菌的影响 7、药物对细菌的影响（药敏实验） 制备普通琼脂平板 将已灭菌的普通琼脂加热融化，冷却至60度左右，倒入灭菌平板中，厚度约为4-5毫米，冷却后备用。 细菌在平板上的接种方法及生长表现 四区划线法：分别接种大肠埃希菌和枯草杆菌，37度培养24小时，观察光滑型菌落和粗燥型菌落的不同点。 细菌在液体中的接种方法（肉汤）及生长表现 分别将大肠埃希菌，枯草杆菌，炭疽杆菌接种至肉汤管中，37度培养24小时，观察三种不同的生长表现：混浊生长、表面生长、沉淀生长。 细菌在半固体中的接种方法及生长表现 在半固体中分别接种大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，37度培养24小时，观察有动力的菌和无动力的菌的不同表现。 皮肤表面的细菌分布及消毒前后对比 将普通平板分区，手指消毒前后分别按一下，37度培养24小时后，比较消毒前后的菌落数。 紫外线对细菌的影响 将大肠埃希菌密集接种于普通平板上，将平板盖一半打开，置于紫外灯下30分钟，合上盖，放入37度培养24小时，观察紫外灯直接照射和隔着平板盖照射的区别。 药物对细菌的影响（药敏实验） 纸片扩散法（K-B法） 原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解，不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。 方法:（4人一组，选4个不同的药物纸片） 1、制备MH琼脂平板：将加热融化的琼脂冷却至60℃左右时倾注于直径为6cm的无菌平板中，使琼脂厚度为4mm，待琼脂凝固后使用，如有冷凝水产生，可放置37 ℃温箱中15-30分钟后使用。 2、无菌棉签蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在平板表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60°，最后沿平板內缘涂布1周。 3、平板在室温下干燥5分钟，用无菌镊子将抗菌药物纸片贴于琼脂表面，各纸片中心相距大于24mm，距平板內缘大于15mm， 37 ℃温箱中孵育16-18小时，量取抑菌圈直径。 结果观察中的注意事项： 1、准确量取抑菌圈直径，若抑菌圈为椭圆形，量其最长径和最短径，取其平均值。 2、若出现双层抑菌圈，一般药物测量内圈，而磺胺类药物则量其外圈。 3、若抑菌圈内有散在菌落出现，排除污染菌的存在和其他影响因素，若无污染菌等，需重做。 结果观察： 　　结果解释：用毫米尺量取抑菌圈直径，参照书上的标准判读结果。按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报告。 例如：抗菌药物丁胺卡那霉素（AMK），每张纸片含药量30微克，抑菌圈≤14mm为耐药，15-16mm为中介，≥17mm为敏感。 小结 * *