实验二细菌单染与复染要点.pptVIP

一、目的要求 1．巩固油镜的使用方法； 2．学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌的简单染色法； 3．学习、掌握细菌的革兰氏染色法； 4．建立“无菌操作”的概念，学习其技术。 二、实验原理 简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染色的方法，常用碱性染料。只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。 革兰氏染色 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。 G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 三、实验材料 变形杆菌、表皮葡萄球菌 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。 革兰氏染色液一套 四、实验步骤 1．简单染色 载玻片——中心加半滴水——无菌操作取菌——涂布于水中（1cm2±）——干燥——火焰固定——染色（1~2min）——水洗——干燥——镜检 2.革兰氏（Gram）染色 涂片——干燥——固定——结晶紫初染（1~2min） ——水洗——用碘液冲去残水，并覆盖1min——水洗——95%酒精脱色（约20－30秒）——立即水洗——番红复染约5分钟——水洗——干燥——镜检 （混合涂片染色）（观看视频） 注意：1．革兰氏染色成败的关键是掌握脱色程度 2．用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 接种环灭菌法 细菌培养物的取材 Left: 单菌染色结果(G+或 G-) Right: 混合菌染色结果(G+和 G-) 细菌细胞结构 革兰氏染色结果及细菌分类 革兰氏染色阴性 五、实验结果 文字记录所观察到的革兰氏染色结果的差别，判断是G－/ G＋。 绘图描述各菌形态（可在一个视野中）。 六、问题与讨论 1革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚？实验关键步骤？ 2对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确证你的结论正确？ 下次实验：细菌的芽孢染色及鞭毛染色