实验二、四果蝇唾腺染色体的制备与观察.docVIP

实验二、果蝇一、实验目的? 通过实验掌握人工饲养果蝇的方法，了解果蝇的生活史果蝇雌雄，从而熟悉遗传学上广泛使用的材料，为以后运用果蝇进行遗传试验作好准备。二、预备知识果蝇的生活史 果蝇属于昆虫纲，双翅目，与家蝇是不同的种。它的生活史包括卵→幼虫→蛹→成虫。 果蝇的生活周期长短与温度关系很密切，30以上的温度能使果蝇不育和死亡，低温则使它生活周期延长，同时生活力也减低，果蝇培养的最适温度20—25。 从表中可以看出25时，从卵到成虫约10天；在25时成虫约活15天。果蝇一般是培养在恒温箱内，盛夏时，要注意降温。连续30 以上的温度能使果蝇不孕或死亡。卵：果蝇卵约长0.5毫米，外围是一层由细胞组成的六角形小格的包膜的卵壳，在背面的前端伸出一对触丝，使卵生产在柔软的食物不致下沉。幼虫期：幼虫从卵中孵化出来要经过两次脱皮，所以幼虫包括三个阶段（令）。蛹化：当幼虫准备准备化蛹时，它们从培养基中爬出来附在较干燥的表面，果蝇在末令幼虫的皮中化蛹，起初白、软，后渐色深、硬，最后发育成一个有成虫体型与器官的人体，这些转变完成以后，成体就从蛹壳的前端强挤出来。 果蝇有雌雄之分，幼虫期区别较难，成虫区别容易（图1）。雄性的腹部环纹5节，末端钝而圆，颜色深。第一对脚的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏，称性梳（sexcombs）。雌性腹部环纹7节，末端尖，颜色浅，跗节前端无黑色鬃毛流苏（图2）。 三、实验材料 果蝇四、实验仪器及用具 双筒解剖镜，广口瓶、解剖针、标签、天平，量筒、棉花、纱布、玻璃棒、电炉、烧杯 五、药品和试剂 琼脂、玉米粉、蔗糖、酵母、乙酸、乙醚 六、实验步骤1 、培养瓶的准备： 无色透明的广口瓶，用自来水洗净，倒置滤水备用。用棉花、外包纱布，做成与瓶口大小相等的棉塞，消毒。 每组领四个广口瓶，制作四个棉塞。 2 、果蝇培养基的配制： 　水　　琼脂　　蔗糖　　玉米粉　　乙酸　　酵母　 750ml?? 　10g　　? 80g 　? 　100g　　　5ml　　数粒 、配制时先将琼脂放入烧杯中。 、用水将玉米粉调成糊状，加入烧杯中煮沸，最后加糖煮沸数分钟即可，滴入乙酸即可。 、待培养基稍凉，每个广口瓶倒入10-30mL的培养基，冷却后加入少量酵母粉。、果蝇的麻醉：? 对果蝇进行检查时，可用乙醚麻醉，使它保持静止状态。因果蝇对乙醚很敏感，易麻醉，麻醉的深度看实验要求而定（作种蝇以轻度麻醉为宜，做观察可深度麻醉，致死也无妨。果蝇翅膀外展45角表示已死亡）。麻醉后的果蝇放在白瓷板上检查，完毕后倒入煤油或酒精瓶中（死蝇盛留器）。果蝇的雌雄鉴别：? 将麻醉的果蝇置于载波片，在显微镜下（4倍或10倍）鉴别雌雄果蝇。? 1)?体型：雌果蝇体型较大，雄的较小。? 2)?腹部末端：雌果蝇腹部椭圆末端稍尖，雄果蝇末端钝圆。? 3)??腹部背面：雌果蝇有明显5条黑色条纹，雄果蝇的有3条，前2条细，后1条宽，延至腹面，肉眼可见腹部末端有一明显黑点。????4)?腹部腹面：雌果蝇有较明显的6个腹片，雄果蝇有4个腹片。?5)?性梳：雄果蝇第一节足底侧最上部附足前端表面有黑色鬃毛－性梳。 实验四、果蝇唾腺染色体的制备与观察一、实验目的1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染色体的制片方法2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征二、实验原理果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的唾液腺染色体唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料 三、实验材料与器具三龄幼虫? 0.9%生理盐水? 红染色液? 解剖镜? 解剖针? 吸水纸 四、实验步骤(1)剥离唾腺 ??? 　在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。 　　每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。 　　唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。? (2)染色：? 吸去生理盐水，注意操作时要边观察边吸湿，最好用解剖针轻压，防止连同唾腺一起吸走；滴加红染色液，染色20-30min(3)压片： 染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在