免疫检测常用方法及运.pptVIP

金标法的应用 HBs-Ag的检测 * 金标法的应用 大便潜血试验（FOB） * 金标法的应用 轮状病毒和腺病毒抗原检测 * 金标法的应用 幽门螺杆菌（HP）抗原检测 * 金标法的应用 O1群霍乱弧菌检测 * 金标法的应用 HCV-Ab检测 * 金标法的应用 艾滋病抗体金标检测 * 金标法总结 上述两种试验的共同特点是：简便、快速、单份测定、可立等结果，除试剂外无需任何仪器设备，且试剂稳定。因此特别适用于急诊检验。 但这类试验不能准确定量，所以主要限于检测正常体液中不存在的物质（例如诊断传染病中的抗原或抗体）以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如 HCG 等）。 虽然检测敏感性和特异性还不如ELISA高，但是检测的项目越来越多和上述的特点使其应用越来越广泛。 * * 正向间接凝集反应 —MP-Ab试验 * 正向间接凝集反应 —MP-Ab试验 检测肺炎支原体的总抗体（IgM, IgA IgG) 以滴度的方式报告检测结果（1:80 1:80、1：160、1:320 ……) * 反向间接凝集反应 用已知特异性抗体致敏载体以检测标本中的相应抗原。 * 抗人球蛋白试验（Coombs试验） 抗人球蛋白抗体参与的间接血凝试验，用于检测抗红细胞不完全抗体 分类： 直接Coombs试验 间接Coombs试验 * 直接Coombs试验 * 间接Coombs试验 * 凝集反应总结 一、直接凝集反应 血型鉴定 二、间接凝集反应 胶乳凝集试验 ASO/RF 1正向间接凝集反应 RPP/TRUST 明胶颗粒凝集 TPPA/MP 2反向间接凝集反应 三、抗人球蛋白试验 直接/间接Coombs试验 * 酶联免疫吸附试验 （ELISA） ① 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ② 使抗原或抗体与酶连接成酶标抗原或抗体，且既保留其免疫活性又保留酶的活性。 ③ 标本中的抗原或抗体、酶标抗原或抗体按一定的次序与固相载体表面的抗体或抗原反应，并通过底物与酶的反应来反映标本中的抗原或抗体的量。 * 酶联免疫吸附剂试验 * 酶联免疫吸附试验 双抗体夹心法 双抗原夹心法 间接法 竞争法 捕获法测 IgM 抗体 * ELISA—双抗体夹心法 用特异性抗体进行包被和制备酶标抗体，以检测相应的抗原。 乙肝标志物中HBsAg、 HBeAg的检测常采用本法 * ELISA—双抗体夹心法 * ELISA—双抗体夹心法 * ELISA—双抗原夹心法 用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 抗HBs的检测 抗HCV的检测 抗HIV的检测 * ELISA—双抗原夹心法 * ELISA—竞争法 标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。如受检标本中无抗体，则酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。加入酶标抗原后就显色深。如受检标本中含有抗体，则与酶标抗体以同样的机会与固相抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固相抗原结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。加入酶标抗原后就显色浅或不显色。 * ELISA—竞争法 * ELISA—竞争法 最常见的应用： 乙肝HBeAb、 HBcAb检测 * ELISA—捕获法 （1）将抗人 IgM 抗体（抗人 IgM μ 链抗体）连接在固相载体上，形成固相抗人 IgM。 （2）加入标本， IgM 抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他抗体。 （3）加入特异性抗原试剂，它只与固相上的特异性 IgM 结合，洗涤。 （4）加入针对特异性抗原的酶标抗体，形成固相二抗 —IgM抗体—抗原 —酶标抗体复合物。 （5）加底物显色，如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性 IgM 抗体存在，是为阳性反应。 * ELISA—捕获法 以优生四项IgM抗体检测为例 * ELISA—捕获法 甲肝IgM抗体测定 * ELISA总结 酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性， 几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值达 ng 甚至 pg 水平。酶免疫测定标记试剂比较稳定，且无放射性危害。因此，酶免疫测定的应用日新月异，酶免疫测定的新方法、新技术不断发展。 * 固相膜免疫测定 利用微孔膜（主要是醋酸纤维素膜）作为固相进行免疫检测的方法 根据标记物的不同分为两类： 酶标固相膜免疫测定： 酶免疫斑点法