真菌基因组DNA的提取和通用PCR检测方法的建立.pdfVIP

检验 医学 ????年 ??月第 ??卷第 ??期 ???????????????????，?????????????．??????．?????? ???? 文章编号 ：????—????????????????????? 中图分类号 ：????? 文献标志码 ：?? 真菌基 因组 ???的提 取和通用 ???检测方法 的建立? 曹国君?，? 赵 缜?，? 彭奕冰?，? 季育华?，? 孙佳彬?，? 卫蓓文?，? 刘? 璐? ??．上海交通大学医学院附属瑞金 医院检验科 ，上海 ??????；? ?．上海 市 闵行 区 中心 医院检验 科 ，上海 ???????? 摘要 ：目的 改 良真菌 基因组 ???的提取方法 ，建 立真菌 通用 聚合 酶链反 应 ?????，为 目前 临床真 菌感 染? 的早期诊 断 、预防和治疗提供有效工具 。方法 参 考前人报道的多种真菌基 因组 ???的提取 方法 ，作改 良以确? 立本研究 中所 采纳的手段 ，并应用真 菌核 糖体 ?????????通 用引物 ，以实验室保存 的标准菌株及临床分离菌株? 来建立 临床真 菌感染 检测用通用 ???。结 果? 白念珠 菌和烟曲霉在 ??℃温度下 分别 作用 ??和 ??????可以完? 全被灭活 。经 目前 多种 破 壁 方 法 的探 讨 ，发 现对 于 白念 珠 菌 ?单 细 胞 真 菌 ?选用 酶 消化 法 ，破 壁 效 率 高 达? ??．??％ ，而烟曲霉?多细胞真菌 ?则需 要酶消化 法与打击 器振荡 法联合 应用 ，其破壁 率也可 达 ??．??％ ，进一 步? 用酚氯仿法抽提其基 因组 ???，能够获得相对纯度高且有一定得量 。当选择 真菌 ?????????区间的一对通用引? 物 ，通过 ???反应体 系的优化 ，使得本研究 中建立 的通用 ???，对 于 白念珠 菌和烟 曲霉 的检 测下 限分 别为 ?个? 和?．?个 ，其 ???产 物测 序结 果与数据库 比对完全一致