用于质谱鉴定蛋白质胶内酶解方法的优化.pdfVIP

南方农业学报 ????，?????：???—???? ??????????????????????????????? ????：／／???．??????．???? 用于质谱鉴定蛋 白质胶内酶解方法的优化? 胡? 炜 ，付 强 ，朱平 川 ，杨 丽 ，刘振方 ，张? 明? ?亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 ???????? 摘要 ：【目的 】提高蛋白质胶 内酶解效率 ，减少萃取过程中肽段 的损失 ，增 加质谱鉴定 的成功率 。【方法 】在 常规胶? 内酶解 方法的基础上 ，优化脱 色、酶解 、萃取等步骤 ，包括 ：用铁氰化钾和硫代硫酸钠对银染胶块脱色 ，酶解温度提 高? 至??％，以??????／??酸氢铵 作为酶切缓冲液 ，使用??％乙腈 ?????水溶液?步萃取 ；并使用一步法胶 内酶解探索快? 速胶 内酶解方法 。【结果 】使用铁氰化钾和硫代硫 酸钠可在短时间内将 银染胶块完全脱 色 ，??℃温浴可使 酶切 时问由? ????减少为???，以???????／?? 酸氢铵作为酶切缓冲液 ，可省去??????脱盐步骤 。优化后 ，质谱鉴定率提高??．?％?绝对? 值 ?，且能 明显 高酶切效率 ，使 目标肽段更高丰度地呈现出来 。【结论 】优化后的胶 内酶解法可显 著提 高蛋 白质胶 内酶? 解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率 ，其中一步法胶内酶解法有效减少了胶 内酶解时 间和步骤 ，可用于高 丰度蛋 白质? 的快速质谱检测 。? 关键 词 ：胶 内酶解 ；质谱鉴定 ；成功率 ；肽段覆盖率? 中图分类号 ：????? 文献标识码 ：?? 文章编号 ：????— ????????????—????—??? ???????? ?????? ???????????????????????????????????????? ???? ????????? ???????●?’????‘?～????●??? ??????，????????，??????????????，???????，?????????????，??????????? ??????????????