培养基配制201603-2.docVIP

实验一：培养基母液配置（8、9） 清洗器皿（初次使用注意事项）并晾干。 配置N6培养基等母液（每种母液体积100ml） 培养皿（每组10个）清洗、晾干、报纸包裹、线绳捆扎、灭菌烘干 蒸馏水灭菌 天平的用法：水平调节；称重时需要关好天平所有玻璃窗。 药品内部的塑料盖，记得盖上，如果不明，擦拭干净再盖上。 定容：先称2/3体积水，然后顺序加试剂，前一试剂溶解后，加另一试剂，最后用滴定瓶定容。 值日：清洁桌面、地面；所有物品使用后归位（天平盖上罩子）；座椅归位； 不迟到早退， 需要的克数=（0.166g/147g）*165g 摩尔浓度=0.166/147=x/165 N6培养基母液（实际使用为20x）： 本次实验做100ml 10x KNO32.830gCaCl2·2H2O0.166g MgSO4·7H2O0.135gKH2PO40.400g(NH4)2SO40.463g注：配制时按表中所列顺序逐一添加，每种成分溶解后再溶解另外一种成分。 B5微量母液： 本次实验做： 1000ml (100倍)含 KI0.0750gH3BO30.3000gMnSO4·H2O1.0000gZnSO4·7H2O0. 2000gNa2MoO4·2H2O0.0250gCuSO4·5H2O0.0025gCoCl2·6H2O0.0025g注：本次实验各试剂用量过少，精确度不够，可全班3个组先做1000X，再平均分成3份给每个组。天平用万分之一天平。 B5有机母液： 烟酸（Nicotinic acid）1mg/ml盐酸吡哆醇(VB6)1mg/ml盐酸硫胺素(VB1)10 mg/ml肌醇(myo-Inositol)10 mg/ml 4)铁盐： 本次实验做：100ml (100倍) FeSO4·7H2O0.278gNa2EDTA·2H2O0.373g注：配制顺序如下 称取0.278g FeSO4·7H2O溶解于20ml去离子水中（A）。 称取0.373g Na2-EDTA·2H2O溶解于20 ml去离子水中（B）。 将B置于70℃水浴锅中直至溶质完全溶解（C）。 将A倒入C中混合，置于70℃水浴锅中保温2h（小时）。 定容至100ml。 5）激素 激素溶解方法母液浓度6-BA加稀碱溶解（1M NaOH），再用蒸馏水定容1 mg/mlNAA加碱溶解（1M NaOH），再用蒸馏水定容1 mg/ml2，4-D加少量酒精溶解，再用蒸馏水定容0.25 mg/ml 实验二：培养基配置及灭菌（10） 灭菌，晾凉：培养皿、枪头、蒸馏水（开、关盖子）后，培养皿烘干。 （2-3小时）培养基配制：母液称量、添加琼脂、调节pH、导入三角瓶，放入磁力搅拌棒，灭菌，凉到50-60度左右，摇匀，分别注入培养皿（25ml左右） 超净台风干后，保鲜膜包装，放入4度冰箱，可挑选一培养皿（包好）放于25度，进行污染观察。 培养基配方 每组做三个0.1升，分别放到三角瓶里，封口， 每0.1升含有： N6大量元素（10x）：10mlB5微量：1ml铁盐：1ml烟 酸：0.1 ml盐酸吡哆醇：0.1 ml盐酸硫胺素：0.1 ml肌 醇：1mlL-pro: 0.28g蔗糖：3gCH （Casein acid hydrolysate）:0.03g2,4-D :0.8mlPhytagel:0.4gPH值：5．8 粳稻成熟胚愈伤组织诱导培养基（每升含量）： N6大量元素（10x）：100mlB5微量：10ml铁盐：10ml烟 酸：1 ml盐酸吡哆醇：1 ml盐酸硫胺素：1 ml肌 醇：10mlL-pro:2.8g蔗糖：30gCH :0.3g2,4-D :8mlPhytagel:4.0gPH值：5．8 2）培养基配置 （1）在配置培养基时取适量(配置培养基总量的2/3左右)的蒸馏水放入容器内。 （2）把锅放在电磁炉上加热，同时加入剪断的琼脂条。 （3）不停搅拌，防治粘锅，同时加速溶解。 （4）按量称取蔗糖并加入，同时搅拌。 （5）待琼脂条、蔗糖完全溶解后加入母液Ⅰ、母液Ⅱ（80℃左右），然后搅拌均匀。 （6）加入铁盐。 （7）待培养基冷却至50-60℃时加入有机成分，到培养基达到40℃时加入激素。 （8）加入蒸馏水定容到量，测定pH值，用0.1mol/L NaOH 或HCL 将培养基的pH调至所需数值（PH=6.0左右）。 （9）清洗培养瓶、培养盖，沥干水份。 （10）用分装器将培养基分装到三角瓶中，趁热分装。分装时注意不