无创产前技术教程.pptx

无创产前胎儿DNA检测技术简介;唐氏综合征;传统产前诊断技术;无创产前诊断方法;胎儿细胞（fetal cell）;游离胎儿DNACell-free fetal(cff) DNA;ChrN: 100 Chr21:100;技术流程;血样采集;;技术流程;4℃，1600g;在样品制备过程中，具有以下任意一条不合格的，判定为不合格品： (1) 血浆分离后存在明显的溶血； (2) 分离后血浆体积未达到最低要求(要求大于1.2ml)； (3) 血浆全部用于DNA提取后总量未达建库最低要求(30ng)； (4) DNA提取过程中，阴性对照可以检测到浓度。;DNA提取;技术流程;末端修复和加“A”;接头连接;;2100检测片段大小 ;在文库制备过程中，具有以下任意一条不合格的，判定为不合格文库： (1) 电泳检测后发现接头未连接； (2) 电泳检测或2100检测后发现存在接头污染； (3) 2100检测后发现文库片段大小不合格，文库主峰大小为290bp左右，次峰大小为450bp左右； (4) 定量检测后，发现文库的浓度过低(浓度低于30ng/ul);技术流程;将被打断成几百个碱基（或更短），并在两个末端加上接头(adapter)的基因片段按一定浓度进行稀释。 将基因片段固定在芯片(Flow Cell)上。由于芯片表面连接有一层单链引物(Primer)，经处理后的碱基片段与芯片上的引物进行互补连接，被“固定”在芯片上 。 引物扩增，以样品为亲本链，使芯片引物延长形成复制链。;;剩下的复制链其一端“固定”在芯片上，另外一端随机和附近的另外一个引物互补，被“固定”住，形成“桥”(bridge) 。 形成的单链桥，以周围的引物为扩增引物，在芯片表面进行扩增，形成双链。 双链经变性成单链，再次形成桥，并作为下一轮扩增的模板继续扩增反应 。 反复若干轮扩增，每个单分子得到了大量扩增，成为单克隆“DNA簇群”。; ;;;可逆阻断技术;Base Calling;;;HiSeq 2500 试剂;Flow Cell 平台;;;;;Flow Cell Swath/Tile;;HiSeq Control Software (HCS);HCS操作界面;;;;;基因信息分析;样品 类型;