是要计可培养的数量还是测菌液内菌的数量。如果计可培养的.doc

是要计可培养的数量还是测菌液内菌的数量。如果计可培养的数量的话就直接涂布到琼脂培养基上，培养后计数就可以。若是要计菌液里的数量可以测一下OD值或者用荧光燃料染色后再在显微镜下计数。 菌悬液的浓度要求的确是每毫升小于100cfu，但是最好在50到100cfu之间，小于50的话容易出现假阴性。还有你是要做无菌的方法验证还是无菌培养基的灵敏度检查呢？至于确定菌的量，是在硫乙醇中计数的。其实无菌方法验证中的菌悬液的制备也是依中国药典（2005年版二部）附录XI H无菌检查法中“培养基灵敏度检查”项下的方法，制备成小于100 CFU/ml的对照用菌液。所以无论你做什么，菌悬液的制备方法都是一样的。具体方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培养24小时，然后吸取1毫升培养液用生理盐水进行10倍稀释，我的经验是，稀释到10的-7次方就是在100cfu以下了（这个你得自己多做几次平行实验或验证实验，看到底稀释到多少倍。最初不好把握的时候可以同时培养几个临近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸盐培养基到试管里（要求无菌），然后接种1ml制备好的菌悬液到硫乙醇试管里，在32.5度下培养18h，然后开始计数。生孢梭菌在液体的硫乙醇里会长成梭子一样的单个菌落，这时拿的时候千万不要震动，然后开始计数（一个单独的“梭子”计一个菌落）。注：如果培养时间太长会产生浑浊，不便于计数。如果震动试管也会浑浊。硫乙醇的量尽量大一点，这样便于计数。一些具体的东西，还需要你实际去操作后，发现问题，再解决问题。貌似你现在的经验不是很足，最好的是找个懂的人带你做几次，或去别的公司或研究所参观学习，这样学起来会快一点。 ?方便的生孢梭菌计数方法附件: 生孢梭菌计数采用流体硫乙醇酸盐培养基(含琼脂),称取培养基15g,再加入纯化琼脂粉0.4~0.5g加入500ml蒸馏水后加热使溶解后分装至30*200的大试管中,50ml/管,加塞,包扎后灭菌,培养基温度保持在45~50摄氏度时,将稀释好的生孢梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培养基中,轻轻摇匀后置30~35摄氏度培养16~20小时(不强求厌氧环境培养),立即观察点计菌数,切记培养期间不可摇动试管,生长的微生物群体在培养基中分散成小米状,注意选择菌数在30~50之间的试管,便于点计.把我计数时的图附上,以便大家参考 生孢梭菌计数采用流体硫乙醇酸盐培养基(含琼脂),称取培养基15g,再加入纯化琼脂粉0.4~0.5g加入500ml蒸馏水后加热使溶解后分装至30*200的大试管中,50ml/管,加塞,包扎后灭菌,培养基温度保持在45~50摄氏度时,将稀释好的生孢梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培养基中,轻轻摇匀后置30~35摄氏度培养16~20小时(不强求厌氧环境培养),立即观察点计菌数,切记培养期间不可摇动试管,生长的微生物群体在培养基中分散成小米状,注意选择菌数在30~50之间的试管,便于点计.