携带MAGE-A3抗原基因重组腺相关病毒载体包装质粒pAAV-MAGEA3的构建.pdfVIP

第 ??卷 总第 ??期? 西 北 民 族 大 学 学 报 ?自然科 学版 ?? ???．??，??．?? ??????? 年 ??? 月? ?????????????????????????????????????????????????????????????????? ???，????? 携带 ????— ??抗原基 因重组腺? 相关病毒载体包装质粒 ????— ??????的构建? 赵? 霏，慈彩虹，白静雅? ?西北 民族大 学 医学院 ，甘肃 兰州 ???????? ?摘 要 ?目的 ：通过构建重组腺相 关病毒 载体 ??????包装质粒 ????— ??????，制备 以 ????— ??基 因片段为? 免疫 原的重组 ??? 病毒载体 ，为基 因疫 苗 的研 究及 其进 一 步肿 瘤免疫 治疗提 供 实验基础 ．方法 ：提 取人 胎 盘组织 总? ???，采 用 ??— ??? 法 从 中制 备 出含 ??????酶 切 位 点 的 ????— ??基 因，并 将 其 克 隆 至 同 种 酶 酶 切 过 的 ???? —? ????— ?????包装在质粒上 ．根据酶切 鉴定 、????— ??特异 引物 ??? 扩增、???测序 等方法对 插入 的序列进 行鉴? 定 ．结果 ：成功克隆 出 ??????的 目的基 因，并构建 出携带有 ????— ??基 因的 ????— ??????质粒，经检测 插入 基 因? 与 ????．????上序列一致 ．结论 ：成功构建携 带 ????— ??基 因的 ???? 载体 包装质 粒 ????— ??????．? ?关键词 ?????；??基 因；???；???疫 苗；基 因治疗? ?中图分类 号】????．?? ?文献标识码 ??? ?文章编号 ?????— ????【???????— ????— ??? ???疫苗也称为基因疫苗，即将编码某种肿瘤抗原的基因克隆到真核表达载体 中，再用注射器或? 基因枪直接注入人体内，使抗原编码基因能够在宿主体内表达，并刺激机体产生体液免疫或细胞免疫应? 答 ．黑色素瘤抗原 一??????????????????一?，????— ???广泛且高 比例地表达于不同类型 的多种肿? 瘤组织中，而在正常组织中?睾丸、胎盘除外?却并不表达，是一种可用于肿瘤特异性免疫治疗的理想靶? 抗原???．而腺相关病毒?????????????— ??????????，????是应用于基因治疗的一种病毒转染载体 ．因其? 安全 性高 ，宿 主细 胞 范 围广泛 ，不 引起局 部 的炎性 和 免疫 反应 ，没有 免 疫排斥 现象 ，可 以重 复使用 ．可 长? 期表达重组蛋白，理化性状稳定，重组包装滴度高等优点具有极大的优越性 ．本实验中采用 ?型重组腺? 相关病毒包装质粒为载体，拟构建 出富含 ????— ??目的基 因的重组 ???病毒，来获得一种应用于? 肿瘤免疫治疗的新型 ???疫苗 ．? ? 材料 与方 法? ?．? 材 料? 人体正常胎盘组织经产妇同意取 自湖南省妇幼保健院；????包装载体 ????— ????— ?????质? 粒购自美国 ??????????公司 ；大肠杆菌