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小肠结肠炎耶尔森菌调查 [摘要] 目的 了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌及动物带菌情况。方法 2006-2010年采集家畜家禽粪便、冷冻食品共2097份，4℃冷增菌后用选择性培养基进行病原菌分离培养并作生化鉴定，将可疑菌株做进一步的血清学鉴定和生物分型及毒力检测。结果 2097份标本中分离出131株小肠结肠炎耶尔森菌，总的检出率为6.25﹪,其中O:3（携带毒力基因ail+、ystA+、 rbfc+）和O:9血清型的检出率分别为0.76﹪和1.52﹪。108株仅携带ystB基因（82.44﹪）；26株不携带任何基因（19.85﹪）。 131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型，其中生物1A型占74.80﹪;生物3型占1.52﹪;生物4型占0.76﹪。结论 本地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌，有感染人和动物及引起食源性型疾病的可能，因此必须加大该菌的监测力度，以预防小肠结肠炎耶尔森菌病的感染流行。 [关键词] 小肠结肠炎耶尔森菌；血清分型；生物分型；???力基因. 小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布于自然界，是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一［1］，除引起胃肠道症状外，还可引起关节炎，结节性红斑及肠系膜淋巴炎等疾患，甚至引起败血症，造成死亡［2］。本病以散发为主，但也呈暴发性流行，并有明显的地域性分布。该菌还是重要的食源性致病菌，国内外均时有报道过油该菌引起的食物中毒，其原因都是食品污染小肠结肠炎耶尔森菌引起的［3，4］，2006-2010年间采集家畜家禽新鲜粪便及各种冷冻食品2097份进行该病原菌的分离鉴定、血清分型、生物分型毒力因子检测，目的是为了了解高密市食品中小肠结肠炎耶尔森菌和动物带菌情况，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1标本来源 参照《全国小肠结肠炎耶尔森菌监测方案》，采集宿主动物新鲜粪便、各种冷冻食品共计2097份。 1.1.2主要试剂 小肠结肠炎耶尔森菌选择性培养基为美国Acumedia manufactures ,inc.lansing,Michigan 48912 产品；改良磷酸盐缓冲液（PSB）及其他培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司；所用抗生素及api 20 E生化条均为在有效期内。 1.2实验方法 1.2.1分离培养 取动物粪便标本、冷冻食品5g加入45ml的改良磷酸盐缓冲液（PSB）, 4℃冰箱冷增菌后，分别于第7天、第14天、第21天接种CIN和麦康凯琼脂平板，经26℃48h培养后观察挑选可疑菌落（在CIN平板上挑取扁平，有明显的边缘，中心为深红色，周围有透明圆环，成“公牛眼”状菌落，在麦康凯平板上挑取无色半透明不粘稠针尖状大小的菌落）做进一步的鉴定。 1.2.2生化鉴定及分型 将上述可疑菌落转种改良克氏双糖铁琼脂斜面进行初筛，26℃培养24h，根据改良克氏双糖铁及生化性状：斜面和底层均变黄（少数不发酵或迟缓发酵蔗糖斜面可仍为红色）、不产气、硫化氢阴性、尿素酶阳性、26℃培养24h动力阳性、37℃培养24h动力阴性，镜检为革兰染色阴性无芽孢球杆状或球状细菌，用法国梅里埃公司生产的api 20 E生化条做进一步的系统生化鉴定。 1.2.3 血清分型 对可疑菌株用玻片凝集法进行血清分型，同时设生理盐水作为对照。 1.2.4生物分型 将分离到的菌株参照有关文献资料进一步做生物分型1A, 1B ,2 ,3 4 和5型。 1.2.5 毒力相关基因检测 利用聚合酶链反应(PCR)方法测定ail、ystA、ystB 、virF、yadA和rbfc相关毒力基因。 2 结果 2.1标本检出情况 2097份样本中共分离到131株小肠结肠炎耶尔森菌，总的检出率为6.25﹪(131/2097)，其中鸭粪检出率最高为14.7﹪（5/34），冷冻食品检出率最低为0.49﹪（4/811）(表1）。 2.2血清分型 131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在7个血清型， 其中65株为不确定血清型，定型的血清型中，o:5血清型36 株（27.48﹪）；o:8血清型17株（12.98﹪）；o:9血清型6株 （4.58﹪）；o:7,8血清型4株（3.05﹪）；o:3，o:48，o:19,8 血清型均为1株（0.76﹪）（表2）。 2.3生物分型 131株小肠结肠炎耶尔森菌分布在3个生物型， 其中1A型98株（74.80﹪）；生物3型2株（1.52﹪）；生物 4型1株（0.76﹪）；其他30株（22.90﹪）。 2.4毒力分布 对分离到的131株小肠结肠炎耶尔森菌分别进行ail、ystA、ystB 、virF、yadA和rbfc相关毒力基因检测，其中1株o:3血清型携带毒力因子ail+、ystA+、 rbfc+（0.76﹪）；108株仅携带ystB+基因（82.44﹪）；26株不携带任何