实验一产淀粉酶菌的筛选.docVIP

发酵工程实验 从土壤中筛选产淀粉酶菌 姓名 学号 指导教师 专业 从土壤中筛选产淀粉酶菌 摘要：为筛选淀粉酶的高产菌株，利用淀粉水解圈作为筛选模型，从学校树林土壤中筛选淀粉酶产生能力较强的菌株。最后用分光光度计测其酶活力。 关键字：淀粉酶 培养基 初筛 分离纯化 Abstract Object：In order to get higher production amylase bacterial. Using starch hydrolysis circle as a screening model.Screening of higher production amylase bacterial from the school in forest soil. Finally，the photometric determination of its enzyme activity. Key words：amylase medium screening Separation and purification 天然淀粉中直链的约占22％～26％，它是可溶性的，其余的则为支链淀粉。当用碘溶液进行检测时，直链淀粉液呈显蓝色，而支链淀粉与碘接触时则变为红棕色［1，2，3］。淀粉酶是指一类能催化分解淀粉分子中糖苷键的酶的总称，主要包括α－淀粉酶和β-淀粉酶等，淀粉酶广泛存在于动植物和微生物中，淀粉酶对淀粉的分解作用是工业上利用淀粉的依据，也是生物体利用淀粉进行代谢的初级反应的依据［3，4］。 关于淀粉酶活力的测定方法最常用的是以下三种：（1） 平板水解圈法（2） 硝基水杨酸法反应比色法　淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸的显色反应来测定。（3） 碘反应比色法，根据淀粉酶作用后淀粉溶液与碘反应时蓝色物消失，通过比色测定光吸收值，就可衡量该酶活力的大小［9，10］。　　土壤是微生物存在的最佳场所，土壤中的微生物种类和数量都是惊人的，从土壤筛选淀粉酶高产菌株是一个有效途径［1］。细菌的不仅培养更为容易，而且其代谢活力更强［1］，因此，本研究拟从土壤中筛选可产生高活力淀粉酶的细菌菌株，以期获得更经济、易得的高活力淀粉酶。 1 实验原料与方法 1.1 土样来源 长春师范学院家属区树林 1.2 培养基 1.2.1培养基配制： 培养基按以下比例配制后，加蒸馏水调至100%； 富集培养基：可溶性淀粉1%、蛋白胨1%、葡萄糖0.5%、NaCl 0.5%、牛肉膏0.5%、pH7.0； 分离培养基：玉米粉2%、黄豆饼粉1.5%、琼脂粉0.8%、CaCl 0.02%、MgSO4 0.02%、NaCl 0.25%、K2HPO4 0.2%、柠檬酸钠0.2%、硫酸铵0.075%（溶解后加入）、Na2HPO40.2%、pH7.0。 1.3 主要试剂和溶液的配制： a）2%淀粉溶液：准确称取淀粉2g溶于100ml 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。 0.1mol/L的柠檬酸缓冲液、pH=1.0的盐酸 1%的3，5-二硝基水杨酸：精确称取1g3，5-二硝基水杨酸，溶于20ml 2mol/L氢氧化钠溶液中，加入蒸馏水50ml，再加入四水酒石酸钾钠30g，待溶解后用蒸馏水定容100ml，盖紧瓶塞，隔绝CO2。 d）0.1%葡萄糖溶液：准确称取80℃烘干至恒重的无水葡萄糖0.1g，去离子水溶解后定容至100ml。 0.1%标准麦芽糖溶液：称取麦芽糖100mg，用蒸馏水溶解并定容至100ml。 2 实验方法 2.1 采样与稀释： 从实验楼前的小树林中采集土样，称取5g土样，放入装有 45mL无菌水的三角瓶中, 震荡 20m in后静置 5min。然后对其进行浓度梯度稀释到10-6, 分别稀释到10-1 、10-2、10-3 、10-4、10-5、10-6浓度下。 2.2富集培养： 从上述土壤稀释液中各取1 mL注入无菌培养皿中，然后倒入灭菌并融化冷却至50℃左右的富集培养基，小心摇动冷凝后，倒置于37℃保温箱中培养24小时。 2.3初步筛选： 培养24小时后，取出平板，放入-4℃冰箱中冷却30分钟如菌落周围有透明圈，说明该菌能分解淀粉，即该菌株可以产生淀粉酶。 图一10-1 图二10-2 图三10-3 图四10-4 图五 10-5