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2017-04-23 发布于四川
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研究生基础实验技能培训.ppt

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研究生基础实验技能培训

研究生科研实验教学基地建设基本实验技能培训;;1.DNA的提取 DNA提取原理 DNA提取方法操作注意事项;1.1 基因组DNA提取原理;仪器准备：台式离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、移液器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）、镊子（灭菌）、离心管架试剂准备：试剂盒、无水乙醇等;试剂盒;试剂盒内容;操作步骤（重点）;操作步骤（重点）;计算公式： OD260/OD280=1.7-1.9 DNA浓度(ug/ul)=OD260×50×稀释倍数/1000 OD260=0.1 稀释倍数=250 DNA浓度=0.1×50 ×250/1000=1.25 ug/ul;操作注意事项;2.PCR PCR体系和循环条件 PCR操作步骤操作注意事项;仪器准备： PCR仪，微型离心机、移液器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）、镊子（灭菌）、离心管架试剂准备： ddH2O, PCR Buffer，dNTP，引物，PCR聚合酶，DNA模板;2.1 PCR体系和循环条件（重点）;60 ℃， 30s;2.2 PCR操作步骤（重点）;2.3 PCR操作注意事项;3.琼脂糖凝胶电泳凝胶电泳原理电泳方法步骤操作注意事项;3.1 琼脂糖凝胶电泳原理;配置1%的胶：称1g琼脂糖于适当大小三角瓶中，倒入100ml的1*TAE，微波炉加热至完全融化；待凝胶温度降至50-60度时，加入1ul的EB（10mg/ml)，摇匀，将胶倒入放好梳子的电泳板中，自然冷却30-60分钟；轻轻拔掉梳子，将胶放入电泳槽中，倒入1*TAE，没过加样孔；按照1ul上样Buffer+5ul的DNA混合后，点样；每排留一个孔加DNA marker； 100V电泳30分钟，凝胶成像仪照相。;3.3 电泳操作注意事项;M II-3 II-2 II-1 I-2 I-1 0;;作业