10免疫标记技术,3节荧光免疫技术.pptVIP

;第十七章 荧光免疫技术;;目　录 ;荧光免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与荧光检测技术的敏感性和直观性相结合而建立的一种标记免疫技术。 ;第一节 基本知识;一、荧光的基本知识;荧光效率 荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率。 　 ;荧光寿命 　 荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度所用的时间。各种荧光物质的荧光寿命不同。 荧光淬灭 荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高温（≥20℃）、苯胺、酚、硝基苯、I-等 。 * 荧光免疫检测中避免荧光淬灭的发生； 消除非特异性荧光（本底）的干扰。 ;Stokes位移 荧光物质从激发态回到基态的过程中，由于部分能量丢失而导致发射光波长比激发光波长，两者波长之差。 荧光偏振 荧光物质经单一平面的偏振光照射后，吸收光能并发出单一平面的偏振荧光的现象。; 二、常用的荧光物质;三、荧光抗体的制备;第二节 荧光免疫显微技术;;二、方法类型;;;;三、关键技术;标本制作;荧光抗体染色 于已固定的标本上滴加经相关试剂（含适当稀释的荧光抗体），置湿盒内25℃～37℃温育30分钟左右或4℃过夜；然后用PBS充分洗涤，待干燥后镜检。 ;荧光显微镜检查（荧光显微镜） ;隔热滤光片：阻断红外线通过而隔热。 激发滤光片：位于光源和物镜之间，使紫外线 （激发光）透过。 吸收滤光片：位于物镜和目镜之间，阻断激发光 而使发射的荧光透过，保护眼睛。;;设立实验对照:阳性对照和阴性对照 区分特异和非特异染色 阳性细胞显色分布:胞质型、胞核型和膜表面型;四、方法评价与应用;第四节 应用;病原体检测;;其他：如免疫病理、肿瘤等检测;第三节 时间分辨荧光免疫测定;第三节 时间分辨荧光免疫测定;;时间分辨;Eu3+元素的stokes位移 ;二、方法类型;;;;三、方法评价;四、临床应用;第四节 荧光偏振免疫测定;一、基本原理; （一）FPIA原理;二、方法评价;三、临床应用;第五节 免疫芯片技术;一、基本原理; （一）FPIA原理;二、方法类型;三、关键技术;四、方法评价;五、临床应用;荧光免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与荧光技术的敏感性相结合，对抗原或抗体进行定性、定位或定量检测，包括荧光抗体技术和荧光免疫测定。 荧光抗体技术是以荧光素标记抗体,与抗原反应, 在荧光显微镜下观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物，进行定性和定位检测, 分为直接法、间接法和双标记法等。 荧光免疫测定是将抗原抗体反应与荧光物质发光分析相结合，检测抗原抗体复合物中特异性荧光强度，进行定量测定，分为均相和非均相。;