液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯jh.docVIP

实验题目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯 学生姓名 庄 静 辉 学 号 20082401147 专 业 化 学 年级、班级 2008 级3班 实验指导老师 曹玉娟 实 验 评 分───── 一、实验目的 1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法。 2、了解高效液相色谱仪的构造、原理及操作技术。 二、实验原理 高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 三、主要仪器和试剂 （1）仪器： 高效液相色谱仪(LC-20AT)[配有紫外检测器，ODS色谱柱4.6mm×15cm]；10μL，100μL微量注射器 ； 试剂： 苯、甲苯混合标准溶液：1.0μL/mL 、2.0μL/mL、5.0μL/mL、10.0μL/mL 甲醇：99.9% 苯和甲苯混合待测溶液 四、实验步骤 1、色谱条件优化 按操作规程开机，并调好最佳色谱条件，使仪器处于工作状态。控制流动相流速为甲醇：0.8mL/min、水：0.2 mL/min；柱温30；检测波长254nm；选择60%和85%甲醇，进行色谱条件优化。 2、苯、甲苯定性分析 在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL微量注射器分别进样5μL苯和甲苯混合待测溶液 (微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。 3、苯、甲苯定量分析 在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL微量注射器分别进样1.0μL/mL、2.0μL/mL、5.0μL/mL 、10.0μL/mL的苯和甲苯混合标准溶液5μL。观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线。 4、苯和甲苯混合待测溶液分析 根据得到的苯和甲苯混合待测溶液的液相色谱图上显示的峰面积值，从绘制的标准曲线上查出苯和甲苯混合待测溶液中苯和甲苯的各自的浓度。 五、数据记录及结果分析 ①、色谱条件优化 ②、定性分析 样品 苯 甲苯 保留时间 3.177 3.872 、定量分析 ?苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml,5 ul/ml, 10 ul/ml。 苯 甲苯 浓度 峰面积 浓度 峰面积 1 ul/ml 140393 1 ul/ml 313570 2 ul/ml 321630 2 ul/ml 642955 5 ul/ml 811288 5 ul/ml 1480995 10 ul/ml 1572219 10 ul/ml 2710495 Y = aX + b a = 158314.2 b = -1031.558 R^2 = 0.9993084 R = 0.9996541 Y = aX + b a = 264149.7 b = 98330.34 R^2 = 0.9978541 R = 0.9989265 ④、未知样品浓度 未知样品 苯 甲苯 浓度 4.53ul/ml 4.11 ul/ml 六、思考题 实验中为什么采用标准曲线法作为定量的方法？ 答：因为实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单。只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作、计算复杂，不能快速分析，故实验中采用标准曲线法作为定量的方法。