液相色谱法用于不易挥发有机化合物混合物的定性分析.docVIP

实验四：液相色谱法用于不易挥发有机化合物混合物的分析 实验目的： 学习利用高效液相色谱仪分离化合物和检测化合物的含量的方法 通过对样品的定量测定，初步掌握获得高效液相色谱图和数据的一般操作程序与技术 学习谱图和数据的处理方法 实验原理： 高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的流动相和固定相间的分配系数不同，当试样随流动相进入色谱柱后，组分就在两相间进行反复多次（103~106）的分配，由于固定相对各种组分的吸附能力不同，各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定柱长后彼此分离，依次从色谱柱流出，通过检测器时样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 实验仪器与试剂： 仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱 试剂：，，-烟酸乙酯混合液，甲醇（AR），超纯水实验步骤： 准备准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。配制样品（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站）。波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键[Enter]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 , w4流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 更换流动相并排气泡将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 平衡系统按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开在线色谱工作站软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下数据收集页的 [查看基线] 按钮。等度洗脱方式 ; g5 J; Q按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.6操作。观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。进样）进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取。1 苯 4.467 1330430.2 0.00000 100.0000 1.525 图一、苯的高效液相色谱图 表二：苯的液相色谱定性分析数据表 峰号 组分名 保留时间 面积 浓度 面积% 拖尾因子 1 甲苯 4.976 1712141.3 0.00000 100.0000 1.272 图二：甲苯的高效液相色谱图 表三：混合物的高效液相色谱数据表 峰号 组分名 保留时间 面积 浓度 面积% 拖尾因子 分离度 1 4.476 447799.3 0.00000 29.8004 1.953 -- 2 4.974 1054862.9 0.00000 70.1996 1.271 2.173 图三：混合物高效液相色谱图 数据对比分析： 最上面的：苯，中间的：甲苯，最下面的：混合物 实验结果分析： 定性分析： 根据实验原理，各待测物在互不相溶的两相溶解度不同，具有不同的分配系数，在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移速率不同。先用已经知浓度的甲苯、和苯分别通入色谱柱，得知苯在4.467min时流出，甲苯在4.976min时流出，由数据对比分析可知，上面的图谱中保留时间为4.476min的为苯，保留时间为4.974min的为甲苯。 2、定量分