酶解马氏珠母贝肉制备降血压肽工艺条件优化.PDFVIP

Mar ine Sciences/ Vol. 32, No. 8/ 2008 酶解马氏珠母贝肉制备降血压肽工艺条件优化 张政委 1 ,刘旭辉1, 2 ,周俊峰1 ,吴宁熙1 ,童张法1 ,廖丹葵1 ( 1. 广西大学 化学化工学院,广西 南宁 530004; 2. 广西河池学院 生化系, 广西 宜州 546300) 摘要:以马氏珠母贝 ( P inctada mar tensii) 肉为原料, 选用 6 种蛋白酶在各自适宜的条件下进行酶解, 采用 H PLC法分析酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性 ( IP ) , 筛选出碱性蛋白酶为其制备的最佳酶 种类, 并确定了水解度为 21%时, 产物具有较好的抑制活性。在此基础上, 分别考察了加酶量,底物浓度, 酶 解温度及 pH 对水解度的影响。结果表明:当加酶量为 0. 175 g/ L, 底物浓度为 35 g/ L,温度为 45e , pH 为 9. 5,水解时间 240 min 为酶解最适宜工艺条件。通过 SDS2聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子质量分布,表明酶 解产物中主要为 14. 4 ku 以下的多肽分子。 关键词 :酶解;马氏珠母贝(P inctada mar tensii) ;降血压肽;工艺条件优化 中图分类号: S98 文献标识码: A 文章编号 : 100023096(2008)0820025205 高血压是目前全球范围内重大的公共卫生问题 之一,被认为是引发动脉硬化及心肌梗塞等心血管 疾病与肾衰竭的主要因素。目前, 治疗高血压的方 法主要以传统化学合成的药物治疗为主, 但由于其 易引起低血压、心动过缓、呕吐等副作用 [ 1] ,因此, 近 年来研究人员把目光转向于更安全的降血压药物上 来,其中来源于食物蛋白的具有降血压活性的血管 紧张素转换酶抑制肽(Angiotensin I2convert ing en2 zyme inhibitory pept ides, ACEI) 越来越引起重视, 由于其安全性高且往往附带如免疫促进、减肥及易 消化吸收等生理功能,因此备受人们青睐, 成为生物 活性肽研究领域的热点之一[ 2]。目前, 人们已先后 从多种动物蛋白和植物蛋白的酶解产物或发酵制品 中分离得到血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽, 并通 过动物实验证明了具有良好的降压效果, 这其中包 括中国毛虾(Acetes chinensis) [ 3]、太平洋牡蛎( Cra s2 sostr ea g iga s) [ 4]等动物蛋白。 马氏珠母贝( P inctada mar tensii ) , 又称合浦珠 母贝,是中国海产珍珠养殖的主要贝类, 其蛋白质含 量丰富,营养价值高[ 5]。近年来由于珍珠养殖业的 快速发展,珠母贝肉数量已相当可观,仅广西、广东 、 海南三省的年产量就有数千吨之多, 但其主要用于 饲料、调味品、罐头等,价格低廉, 经济附加值低。因 此,开发具有降血压作用的马氏珠母贝功能食品, 这 对提升其经济附加值具有重大意义。本研究以马氏 珠母贝肉为原料,通过用 6 种蛋白酶在各自适宜的 条件下水解制备降血压肽, 筛选出制备马氏珠母贝 降血压肽的最佳蛋白酶种类,并对其工艺条件进行 优化,以获得具有较好体外降压效果的产品。 1 实验材料与方法 1. 1 材料和仪器 马氏珠母贝肉购于广西北海珍珠养殖基地;马 尿酸、马尿酰组氨酰亮氨酸 (HHL )、血管紧张素转 化酶(ACE)分别购于 Sigma 公司;各种蛋白酶见表 1, 其中 Flavorzyme 风味蛋白酶由诺维信 (中国)公 司惠赠,其他化学试剂为国产色谱纯或分析纯。 A288型组织捣碎匀浆机, 江苏金坛市医疗仪器 厂; 4K15 型低温高速离心机, Sigma 公司; Agilent 1100高效液相色谱仪, 美国安捷伦科技有限公司; DYY26C型电泳仪, 北京六一仪器厂。 1. 2 方法 1. 2. 1 酶解工艺 贝肉解冻后, 去足丝洗净,并匀浆至糊状。准确 称取蛋白质含量为 3. 5 g的贝肉浆, 加水稀释至所需 浓度, 搅匀。煮沸 15 min, 冷却至室温后, 用 2. 0 mol/ L NaOH 或 HCl调至各酶作用适宜 pH 范 围和作用温度(见表 1) , 并加入一定量酶启动反应。 水解过程中加入 0. 1 mol/ L NaOH 或 HCl标准溶液 维持体系 pH 恒定, 水解结束后, 调 pH 至中性, 加 热至 100 e 灭酶 15 min, 酶解液在 5 e 、8 000 r/ min 收稿日期: 2008202204 ;修回日期: 2008204216 基金项目: 广西科学基金资助项目 ( 桂科攻 081500621, 桂科自 072823