植物组培实验报告-高睿.docVIP

不同激素配比对烟草叶片外植体分化的影响 摘要：培养基是调控烟草叶片外植体分化途径的一个重要因素, ,以不同激素配比的培养基比较其对烟草叶片外植体分化的影响，研究不同激素浓度配比对外植体分化的影响。实验结果表明：在NAA/6-BA激素配比中，MS+NAA（0.5mg/L）+6-BA（1.5mg/L）为出芽最优培养基；在IAA/6-BA激素配比中，MS+IAA（0mg/L）+6-BA（2.0mg/L）是最优生根培养基。得出一结论：当NAA浓度低时（即6-BA浓度高时）有利于芽的分化，当IAA浓度高时（即6-BA浓度低时）有利于根的分化。 关键词：激素配比，烟草叶片，外植体，愈伤组织 前言 烟草（Nicotiana tabacum）属茄科烟草属的一年生草本植物，原产于美洲和大洋洲。烟草作为重要的经济作物和工业原料作物，具有药用、工业用、保健美容等价值，不仅对国民经济的发展起着重要作用, 而且作为模式植物在植物研究中得到广泛应用。 目前，烟草一般采用有性繁殖，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收入。而通过组织培养技术，可以保持烟草优良品种的优良性状，减少病虫害，从而达到高产优质的目的[2,4,5]。由于其易进行组织培养得到再生植株，被广大学者誉为植物组织培养的理想植物，也是研究植物细胞分化和脱分化的理想材料，故此烟草在植物组织分化研究中占据了重要的地位。 激素是植物组织培养的关键因素，调节激素水平和配比，已成为提高组织分化频率的有效手段，人们利用植物愈伤组织研究激素调节工作已有许多报道[4,6,7]。但在具体试验中，激素的种类、浓度和配比，十分错综复杂。因此，在实际试验中需对培养条件进行筛选，以求得最适激素种类、浓度和配比。本实验以烟草叶片组织为外植体进行组织培养，主要研究不同植物激素配比的MS培养基上烟草愈伤组织诱导的情况。 材料方法 1 实验材料 无菌烟草苗叶片 2 实验试剂 MS培养基母液NAA，6-BA，IAA，70%乙醇，1mol/LNaOH，1 mol/L HCl。 3 实验仪器 超净工作台高压灭菌设备手术剪、长柄剪子, 解剖刀 酒精灯, 电子天平无菌吸水纸，标签纸，记号笔，烧杯培养皿三角瓶，线绳,封口膜，移液抢等。 4实验设计 编号 激素比 2组 NAA(mg/L) 6-BA(mg/L) IAA(mg/L) 6-BA(mg/L) 1 0 2.0 0 2.0 2 0.5 1.5 0.5 1.5 3 1.0 1.0 1.0 1.0 4 1.5 0.5 1.5 0.5 5 2.0 0 2.0 0 备注 MS培养基做对照，每组重复3次，共33个培养皿。 5试验方法 MS培养基 取一个大烧杯，加入一定量的水，再分别加入四种MS培养基母液、蔗糖30g/L，琼脂7g/L，进行加热溶解。用蒸馏水定容至1000 ml，再用1 mol/L 的NaOH和HCl将pH调至5.8。将培养基平均分装入10个100ml三角瓶内，贴上标签。 将培养基放入高压灭菌锅,0.11 Mpa,121℃下灭菌20 min。 接种 a、接种前打开超净工作台紫外灯照射30min,之后关闭紫外灯打开送风开关并通风10min； b、用70%乙醇溶液擦拭超净工作台台面和手，将培养基及接种工具放入超净工作台台面两侧； c、根据实验设计表1植物激素配比添加激素，倒板（超净工作台下进行）； d、取无菌烟草苗的嫩叶片作外植体。将无菌烟草叶片放入无菌碟子中,每片叶子用解剖刀切去边缘后再切成5mm见方小块,在火焰上方接入到各个培养基中，每个培养皿中可接种3-4个小块（超净工作台下进行）； e、将各个培养基贴上标签 ,放到培养室中培养。 （4）进行实验观察记录，并照相。 实验结果 经过30天的观察，对不同的激素配比外植体的发育情况进行了记录。 愈伤组织分化的形态发生 接种培养1周后，培养基内的叶片边缘慢慢上卷，叶片外植体明显膨大，培养2周后，切口边缘处形成淡绿或浅黄色的愈伤组织，; 愈伤组织首先发生在叶片边缘，为淡绿色颗粒状，随着进一步培养，出愈伤不断加大。但多是叶片边缘形成的愈伤不断扩增，叶片中央形成少量愈伤。培养3周后，形成大块的，质地紧密的浅绿色半透明的愈伤组织，并且愈伤组织上出现绿色芽点。再继续培养至30天，进行观察。 激素对愈伤组织分化的影响 本实验以MS培养基为对照，对3种激素设置了两种组合，每种激素组合含5个浓度配比，每组处理3次重复。 2.1在MS对照培养基上，叶片慢慢变黄，枯萎至死，未形成愈伤组织（图1）。 图1 MS对照培养基 2.2在第1组NAA与6-BA激素配比中，叶片外植体均产生了愈伤组织，愈伤组织诱导率为10