第8章节分子生物学研究方法.pptVIP

第三节 DNA重组技术 第一个 DNA 重组子 （Paul Berg, 1972） EcoRI recognition sites λ phage DNA EcoRI cuts DNA into fragments Sticky end SV40 DNA The two fragments stick together by base pairing DNA ligase Recombinant DNA Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. DNA重组的一般步骤 1. 从生物有机体基因组中，分离出带有目的基因的DNA片段。 2. 将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上，形成重组DNA分子。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3. 将重组DNA分子转移到适当的受体细胞（亦称寄主细胞）并与之一起增殖。 4. 从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞，并筛选出已经得到扩增的目的基因。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酶?????? 类 功????? 能 限制性核酸内切酶 识别并在特定位点切开DNA DNA连接酶 通过磷酸二酯键把两个或多个DNA片段连接成一个DNA分子 DNA聚合酶I（大肠杆菌） 按5到3方向加入新的核苷酸，补平DNA双链中的缺口 反转录酶 按照RNA分子中的碱基序列，根据碱基互补原则合成DNA链 多核苷酸激酶 把磷酸基团加到多聚核苷酸链的5-OH末端（进行末端标记实验或用来进行DNA的连接 末端转移酶 在双链核酸的3末端加上多聚单核苷酸 DNA外切酶III 从DNA链的3末端逐个切除单核苷酸 λ噬菌体DNA外切酶 从DNA链的5末端逐个切除单核苷酸 碱性磷酸酯酶 切除位于DNA链5或3末端的磷酸基团 重组DNA实验中常见的主要工具酶 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 基因工程载体是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞自主复制的DNA分子。 一、载体 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （二）类型 1、质粒载体 常用的克隆载体、双链环状的DNA分子（也有线性的）、能独立地自我复制及转录。 作为克隆载体的质粒应具备以下特点: ①分子量小，稳定存在，较高拷贝数； ②遗传标志； ③内切酶点。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （1）pBR322质粒载体 来源于pSF2124质粒转座子Tn3的氨苄青霉素抗性基因（ampr） 来源于pSC101质粒的四环素抗性基因（tertr） 来源于ColE1的派生质粒pMB1的DNA复制起点（ori） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （2）pUC质粒载体 氨苄青霉素抗性基因(ampr)， 大肠杆菌β-半乳糖酶基因(lacZ)的启动子及其编码α-肽链的DNA序列 位于lacZ基因中的靠近5’-端的一段多克隆位点(MCS)区段，它并不破坏该基因的功能。 来自pBR322质粒的复制起点（ori） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.