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微生物實驗-第五組 沈師宇蔡亞倫房 毅洪偉哲 實驗四 – bacterial growth 實驗目的 為了瞭解細菌生長曲線之形成及代表之意義。 實驗器材 大腸桿菌 LB溶液、LB Agar 無菌水 實驗方法 1. 將50μl稀釋後之大腸桿菌，加入LB瓶內，並取出以無菌水稀釋103倍置入cuvette測OD當blank 做T0 2. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋104倍置入cuvette測OD做T1 3. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋105倍置入cuvette測OD做T2 4. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋106倍置入cuvette測OD做T3 5. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋107倍置入cuvette測OD做T4 6. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋107倍置入cuvette測OD做T5 7. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋108倍置入cuvette測OD做T6 8. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋109倍置入cuvette測OD做T7 9. 培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋109倍置入cuvette測OD做T8 10. 記錄以上8小時的數據，並將實驗數據以時間為橫軸，吸光值、菌數對數值為縱軸畫出圖表，並計算生長曲線圖。 實驗結果 T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 時間 0 1 2 3 4 5 6 7 8 菌落數 71 10 19 14 7 25 51 8 1 生存曲綫 0 3.322259 2.124175 1.269245 0.701909 0.928864 0.945498 0.428614 0 菌數 1.851258 1 1.278754 1.146128 0.845098 1.39794 1.70757 0.90309 0 T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 時間(Hr) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 OD值 -0.001 0.003 0.018 0.168 0.532 0.793 0.941 1.052 1.126 OD值 0 0.004 0.018 0.171 0.533 0.792 0.942 1.052 1.127 平均OD值 -0.001 0.007 0.036 0.339 1.065 1.585 1.883 2.104 2.253 討論 從我們這組的生長曲線來看，可以發現到在Ｔ１時細菌大量生長，直到最後Ｔ９細菌大量死亡，ＯＤ值逐漸飆高則是表示液體內細菌的數量，但不論細菌是否存活。加上有污染的情況，所以不排除是因為菌之間互相競爭造成死亡。而污染的原因推測這可能是在種菌的時候不小心摻入的別的菌，造成從T0開始全部都有污染。 實驗五 – control of bacterial growth 實驗目的 細菌由培養基吸收養料後，經過許多不同酵素的作用，可進行一連串之代謝反應，產生能量，提供細胞生長之所需，同時會有廢物的產生，由醣類、脂肪與蛋白質之利用情形，可了解細菌之代謝作用。 實驗器材 大腸桿菌、金黃葡萄球菌、和其他菌種( P . m、E . f 、S . ty、S . e等) 含0.5%澱粉之營養平碟 含5%葡萄糖(Glucose) 、乳糖(Lactose) 、蔗糖(Sucrose) 等3種不同糖汁營養肉湯MR溶液：甲基紅溶液 VP溶液Ｉ：α-Naphthol溶液，VP溶液II：40%KOHKovac’s試劑，革蘭氏碘液 實驗方法 一、澱粉水解試驗 取含0.5%澱粉之培養盤，於底部劃分3區 取出S . e、P . m、E . f 三種細菌分別接種於三區 於37℃培養一天後隔天取出滴上一滴格蘭氏碘液，並記錄顏色。 二、醣類之發酵作用 取試管分別含glucose、lactose、sucrose 5ml 培養溶液。 接種P . m及E . f至以上3之不同醣類的試管中。 於37℃培養至隔天，觀察氣管內空氣量並記錄。 三、MR-VP試驗 將P . m及E . f分別接種於2管MR-VP於37℃培養至隔天 在MR管內加入甲基紅，並觀察期顏色變化 在加入0.5 ml之α-Naphthol與0.5 ml KOH溶液，充分混合。 觀察並記錄其變化情形 四、蛋白質的分解 接種E . coli、E . f至tryp