ELISA基本原理和质量控制.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * 举例：质控图 “即刻性”质控 只需连续测3次，即可对第3次检验结果进行质控。?即刻法的建立具体计算方法如下：1)先将测定值从小到大排列2)计算X和SD。3)计算SDI上限和SDI下限值。4)将SDI上限、SDI下限值与SDI值中的数字比较。 当?SDI上限值和SDI下限值＜n2SD时，表示处于控制范围内，可以继续往下测定，继续重复以上各项计算；当SDI上限和SDI?下限有一值处于n2SD和n2SD值之间时，说明该值在2SD~3SD范围，处于“告警”状态；当SDI上限和SDI下限有一值?＞n3SD时，说明该值已在3SD范围之外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，重新测定。 N n3s n2s n n3s n2s 3 1.15 1.15 12 2.55 2.29 4 1.49 1.46 13 2.61 2.33 5 1.75 1.67 14 2.66 2.37 6 1.94 1.82 15 2.70 2.41 7 2.10 1.94 16 2.75 2.44 8 2.22 2.03 17 2.79 2.47 9 2.32 2.11 18 2.82 2.50 10 2.41 2.18 19 2.85 2.53 11 2.48 2.23 20 2.88 2.56 SI值表 ELISA实验过程中涉及的质量控制—外部质控 ELISA试验中的外部质控(EQA) 用于连续地、客观地评价不同实验室之间的检测结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性。主要控制试验结果的准确度 。 发放质控血清（组合血清）进行调查（PT）。定期发放质控血清至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将检验结果上报。 由上级实验室定期对下级的检测结果进行复核 。 现场调查，携带质控血清到实验室进行现场操作，并对结果进行评价。 学习动物精神 11、机智应变的猴子：工作的流程有时往往是一成不变的，新人的优势在于不了解既有的做法，而能创造出新的创意与点子。一味 地接受工作的交付， 只能学到工作方法 的皮毛，能思考应 变的人，才会学到 方法的精髓。 学习动物精神 12、善解人意的海豚：常常问自己：我是主管该怎么办才能有助于更好的处理事情的方法。在工作上善解人意， 会减轻主管、共 事者的负担，也 让你更具人缘。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * ELISA的基本原理及质量控制The fundamental principle and quality control of ELISA ELISA（Enzyme-linked immunosorbent assay ——酶联免疫吸附实验）是20世纪60年代发展起来的免疫学检测技术，也是目前应用最广泛的传染病检测方法。 ELISA的特点： 敏感度和特异度较高，重复性好。 试剂比较稳定，易于保存。 操作简单，价格便宜，易于在基层大规模使用。 易于标准化和对检测对象进行定量。 可以自动化。 ELISA的基本原理 抗原或抗体在体外结合到某种固相载体表面后，仍然能保持其免疫学活性而能相互特异性结合。 将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体后，这种酶标抗原或抗体既能保留与相应抗体或抗原结合的免疫活性，又同时保留酶的活性。 由于酶具有很高的催化效率，因此可放大抗原抗体反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感性。 　 抗原抗体复合物与酶标的二抗结合，加入合适的底物在酶的作用下显色，颜色的深浅与特异性抗体水平成比例关系，可进行定性和定量分析。 间接法ELISA 间接法ELISA（Indirect ELISA）——将特异性抗原包被于固相载体表面，与标本中相应特异性抗体结合，洗涤后再加入酶标的抗人IgG或IgM抗体与之结合，洗涤后加入底物显色。 1.加样 2.孵育 3.洗涤 4.加入二抗 5.孵育 6.显色 间接法ELISA 使用RF吸附剂 类风湿因子（10％）是一种自身抗体，主要有IgM组成，能与抗原抗体复合物的FC段结合，非特异性IgM抗体（风湿因子）的存在将导致IgM检测出现假阳性结果。 麻疹IgG 麻疹 抗原 麻疹IgM 抗人酶标 IgM抗体 类风湿因子 阳性结果 假 阳 性 结 果 RF吸附剂的组成 RF吸附剂———人IgG抗体 Protein A 羊抗人IgG 因此，在使用间接法ELISA进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理 。 捕获法ELISA 捕获法ELISA（Capture ELISA）——专