抗体的制备课件.pptVIP

抗体的制备 威斯腾生物技术中心 400-675-6758 抗体的概述 多克隆抗 单克隆抗 抗体的概念 动物机体受到抗原物质的刺激后, 由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的, 能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白, 这类免疫球蛋白称为抗体(Antibody,简称 Ab)。 免疫球蛋白(Immunogolobulin, 简称Ig) 是指存在于人和动物血液(血清)、组织液及其它外分泌液中的一类具有相似结构的球蛋白。 Ig根据单体数目、分子量、含糖量、电泳移动率等特点分为6类，主要是IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。 Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成，经二硫键连接呈Y型。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。 五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ （gamma）链和μ（mu）链。 IgG的结构见图。 IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段（Fab）。每个Fab都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc段，无抗体活性，但具有IgG特有的抗原性。 　　IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段，一个Fab双体，称F（ab）2，能和两个相同的抗原结合；另一片段类似Fc，随后被分解成小分子多肽，无生物活性。 　　IgM是由五个单体组成的五聚体，含10个重链和10个轻链，具有10个抗原结合价，由于空间位置的影响，只表现为五个抗原结合价。IgM分子量约为900000，IgG分子量约为150000。 静电吸引:抗原与抗体偶极也能相互吸引;还能通过抗体抗原之间交换电荷反应产生静电力. 多克隆抗体(Polyclonal antibody，PAb): 抗原免疫动物所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由抗原中多种抗原决定簇（即抗原表位）刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体，也称抗血清。 单克隆抗体(Monoclonal antibody, MAb) : 用杂交瘤技术获得能分泌针对某一种抗原决定簇的特异性抗体的杂交瘤细胞系即单克隆抗体细胞系，由此单克隆细胞系产生的大量单一、同质的、高纯度的针对单一抗原决定簇的特异性抗体，叫单克隆抗体。（由于每一个免疫淋巴细胞只能分泌针对单一抗原决定簇的特异性抗体）。 动物产生抗体的机理 抗原（非自己的物质）免疫动物 激活免疫B细胞 转化成浆细胞 分泌针对免疫抗原的特异性的抗体 (一)抗原（Antigen, Ag）是指那些能诱导动物免疫系统发生免疫应答、产生抗体同时又能与免疫应答产物在体内外特异性结合、发生免疫反应的物质。 抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。一个抗原分子可带有不同的决定簇， 在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质，例如乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）等。 (二） 抗原的基本特性 抗原具有抗原性(antigenicity), 其包括免疫原性与反应原性两方面的含义。 1.免疫原性(immunogenicity) 是指抗原能刺激机体的免疫系统，使之产生抗体的特性。 2.反应原性(reactinogenicity) 是指抗原与相应的抗体发生反应的特性, 此特性又称为免疫反应性(immunoreactivity)。 抗原分为完全抗原及不完全抗原： (一)完全抗原 既具有免疫原性又有反应原性的物质称为完全抗原(complete antigen)。如病毒、细菌、真菌等微生物和蛋白质等分子量大于5000Da生物物质 (二)不完全抗原 只具有反应原性而缺乏免疫原性的物质称为不完全抗原(incomplete antigen), 亦称为半抗原(hapten)。多糖、药物、激素、肽类、抗生素、农药等分子量小于5000 Da 物质 半抗原需与BSA、OVA等载体蛋白交联后成会完全抗原才能刺激动物产生相应的抗体 半抗原-载体蛋白： 半抗原单独作用机体的免疫系统时无免疫原性，当与蛋白 载体（carrier)结合形成半抗原-载体复合物时，即可获得免疫原性，这种复合物不但可刺激机体的免疫系统产生针对半抗原的抗体，也可以刺激机体产生针对蛋白质载体的抗体 构成抗原的条件： 一、异物性，又称为异质性或异源性 正常情况下，自身组织或细胞对机体本身无免疫原性。而异种或异体物质，以及化学组