安康七里香蔷薇rpl36―rps8基因序列分析.docVIP

安康七里香蔷薇rpl36―rps8基因序列分析 　　摘要：研究安康地区七里香蔷薇（Rosa banksiae var.normalis）和蔷薇科其他植物间的亲缘关系，选择安康地区七里香蔷薇，对其叶绿体rpl36-rps8序列进行扩增、测序，与GenBank中其他薇科植物的rpl36-rps8序列同源性进行对比分析，利用系统发育分析软件MEGA6，运用邻接法（Neighbor Joining）建构了系统发育树。结果表明，七里香蔷薇与蔷薇属的大花香水月季同源性很高。 　　关键词：七里香蔷薇（Rosa banksiae var.normalis）；rpl36-rps8；序列分析 　　中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）12-3204-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.12.052 　　Abstract：To study relationships of indicate between Rosa banksiopsis and other plants of rosaceae.In this experiment Rosa banksiopsis from ankang was used as experimental material. By extracting genome DNA and PCR amplification，the rpl36-rps8 sequence can be acquired. Then，through Homologous Analysis and comparison of rpl36-rps8 sequences of the plant and other kinds of rosaceae plants in GenBank and with the help of phylogenetic tree by way of Neighbor Joining in MEGA6，the relationship can be compared and analyzed. The experiment showed that Rosa banksiopsis and Rosa odorata has high homology. 　　Key words：Rosa banksia var.normails；rpl36-rps8r；sequence analysis 　　七里香蔷薇（Rosa banksiae var.normalis） ，又名单瓣白木香、七里香、木香花，是蔷薇科蔷薇属木香植物的一个变种[1]。奇数羽状复叶，小叶3～5，卵状长椭圆形至披针形，长约2.5～5.0 cm，缘有细锯齿。托叶线形，与叶柄离生或基部稍与叶柄合生，早落。伞房花序，花白色，单瓣，有芳香。七里香蔷薇为木香花野生原始类型，枝条蔓生，是重要的攀缘观赏花木，广泛生长于中国秦岭山区。植物的叶绿体基因组分为非编码区与编码区，由于非编码区基因进化速率比编码区基因较快，所以非编码区基因多数用于低阶元的系统发育分析。本试验研究七里香蔷薇叶绿体rpl36-rps8基因序列，通过与其他蔷薇科植物的序列比对分析，并构建系统进化树，从分子水平揭示七里香蔷薇与蔷薇科植物的亲缘关系，为七里香蔷薇种质鉴别提供分子依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 植物材料 七里香蔷薇采自安康市香溪洞景区外围地区，采集其茎尖幼嫩叶片，取回实验室保存于4 ℃备用。 　　1.1.2 试验试剂 Biospin植物基因组DNA提取试剂盒购自北京佰亿新创科技有限公司；清洁PCR产物的试剂盒购自Qmega 公司；质粒抽提试剂盒产自Sangon Biotech公司；Taq DNA 聚合酶、pGEM-T Easy载体均购宝生物工程（大连）有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 基因组DNA的提取 用植物DNA提取试剂盒提取总DNA。 　　1.2.2 PCR扩增 PCR扩增反应以提取的3种植物DNA为模板， 扩增rpl36-infA-rpS8序列正向引物rpl36f：5′-CACAAATTTTACGAACGAAG-3′，反向rps8：5′-TAATGACAGAYCGAGARGCTCGAC-3′。PCR反应体积25 μL，包含MgCl2（25 mmol/L）2 μL， dNTPs（2.5 mmol/L）2 μL，10×PCR缓冲液2.5 μL，上、下游引物各（2.5 μmol/L）1.0 μL，DNA聚合酶1.0 U，DNA模板1 μL（约30 ng）。扩增程序为：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火3