第一章菌种扩大培养.pptVIP

（七）液氮超低温保藏 10%甘油或 5-10%的二甲亚枫 做保护剂 移入液氮 冻结 每分钟下降1℃ 第四节 实例 一、谷氨酸发酵的菌种扩大培养 斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵罐 1、斜面菌种的培养 菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸，并要求斜面菌种绝对纯，不得混有任何杂菌和噬菌体，培养条件应有利于菌种繁殖，培养基以多含有机氮而不含或少含糖为原则。 (1)斜面培养基组成 葡萄糖 0.1%，蛋白胨 1.0%，牛肉膏 1.0%，氯化钠 0.5%，琼脂 2.0~2.5%，pH 7.0~7.2（传代和保藏斜面不加葡萄糖）。 (2)培养条件 33~34℃，培养18~24h。 2、一级种子培养 一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培养条件从有利于长菌考虑。 (1)培养基组成 葡萄糖 2.5%，尿素 0.5%，硫酸镁 0.04%，磷酸氢二钾 0.1%，玉米浆 2.5~3.5%(按质增减)，硫酸亚铁、硫酸锰各2ppm，pH7.0。 (2)培养条件 用1000mL三角瓶装入培养基200mI，灭菌后置于冲程7.6cm、频率96次/min的往复式摇床上振荡培养12h，培养温度33~34℃。 (3)一级种子质量要求 种龄：12h，pH值：6.4±0.1 光密度：净增OD值0.5以上 残糖：0.5％以下 无菌检查：(-) 噬菌体检查：(-) 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐 革兰氏阳性反应。 3、二级种子培养 为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在一级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养。种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例。 (1)培养基组成 培养基组成（%） T6-13 B9 T738 AS1.299 水解糖 玉米浆 磷酸氢二钾 硫酸镁 尿素 Fe++（ppm） Mn++（ppm） pH 2.5 2.5-3.5 0.15 0.04 0.4 2 2 6.8-7.0 2.5 2.5-3.5 0.15 0.04 0.4 2 2 6.8-7.0 2.5 2.5-3.5 0.2 0.05 0.5 2 2 7.0 2.5 2.5 0.1 0.04 0.5 2 2 6.5-6.8 (2)培养条件 接种量：0.8~1.0％ 培养温度：32~34℃ 培养时间：7~8h 通风量： 50L种子罐1:0.5 搅拌转速340r／min； 250L种子罐1:0.3 搅拌转速300r／ min 500L种子罐1:0.25 搅拌转速230r／ min (3)二级种子的质量要求 种龄：7~8h pH：7.2左右 OD值净增0.5左右 无菌检查(-) 噬菌体检查(-) 二、啤酒酵母的扩大培养 一般可采用三级扩大培养，扩大倍数：第1级到第2级为8-10倍，第2级到第3级为4-6倍。 1、实验室扩大培养 ? ? ? ? ? ? 三、 生产发酵罐的无菌接种 生产规模发酵罐的接种，包括两个方面：从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器中移种入一个种子罐；从一个种子罐移入另一个生产发酵罐中。 （1）从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种 通常有两种方式 由于微生物传代过程中不断产生变异，即遗传变异是绝对的，而稳定是相对的。菌株的优良性状不可能永久保持下去，即发生衰退（或退化）。这就需要通过创造适宜的环境来限制退化速度，并且要掌握如何让退化的菌种恢复其原来的优良性状（复壮）的方法。 第四节 菌种的衰退、复壮及保藏 衰退（退化）： 由于菌种的自发突变使其典型性状，特别是产量性状发生负变的现象。 一、菌种的衰退 引起菌种退化变异的因素： 遗传基因型的分离 丝状真菌、多细胞组成、有的单核、有的多核，遗传物质基础有多样性的复杂性，为群体繁殖，往往出现遗传基因型的分离，这是数量遗传的自体调节现象。 自发变异的产生：负向变异为多数，结果：目的代谢产物产量下降，生长逐步变弱变慢，孢子形成能力低下等。 原因可能有：长期保藏；频繁传代（例：斜面保藏；发酵厂种子制备）；菌体在代谢过程中产生具有诱变作用的物质；存在增变 人工诱变导致的退化变异 一、菌种的衰退 衰退的防止： 控制传代次数：不超过7代，易变异的不过5代 砂土管、冻干管保藏的原种，开启不能超过3次，以防污染。 选择良好的保藏方法：保证菌不死、不衰、保存活性及原有典型性状 良好的培养条件：注意斜面菌株的培养条件。（保藏培养基、活化培养基） 采用不同类型的细胞进行接种 产孢子霉菌 细菌 一、菌种的衰退 复壮： 广义——是指在菌种的生产性状尚未衰退前，就经常有意识的进行纯种分离和生产性能的测定，从而使菌种的生产性能逐步提高的一种措施。 狭义——指菌种已经发生衰退后，再通过纯种分离和性能测定的办法从衰退的