厦门大学生命科学学院.doc

注意事项及填写说明（送样前必读） 如果阅读完以下说明还不知道该如何准备样品，请到A113咨询；TripleTOF 5600和5600+ 只 送样时需一起提交申请单；样品不能含有SDS、TritonX-100、NP-40、PEG、Tween-20、甘油会抑制如需所用 所送样品所属的蛋白库要在能有哪些信誉好的足球投注网站到，或者 胶样品： 要求 可以保存单个?L； 制样注意事项 样品尽可能跑在一条泳道内，如果样品体积太大无法跑在一条泳道中最好进行浓缩处理，以提高样品最少 cm。建议如非必要胶的浓度最好不要 10%，影响 不建议银染；或银染时，敏化不加戊二醛，染色时不加甲醛，显色时才加（戊二醛会造成蛋白交联，影响酶解） 考染样品控制染色时间，不宜染色太深（看得到条带即可），然后用脱色液脱色然后用把即可（脱色所用 在通风橱切胶，切胶时请带上口罩，女生绑好头发，采用干净的手套和一次性刀片； 为减少样品损失，切胶时请务必去掉非目的条带部分，尽量减少样品体积，建议每管样品胶体积小于300ul； 切胶时请尽量避免条带间的交叉污染；把胶切成约2 mm X 2 mm尺寸的小块放于进口1.5 mL 离心管内（每管 uL），然后用超纯水（ddw）洗三遍以上，随后用乙腈脱色液[40% 乙腈（ACN），50 mM碳酸氢铵（ABC）in H2O]脱至无色，样品最后保存在乙腈脱色液中。 请务必根据marker估计每个样品的蛋白量（多少ug或ng），否则不受理该申请单（无法进行酶解处理）； IP样品： 样品以溶液方式送样（必须注明样品体积uL）：A.如果从细胞裂解液中IP，裂解以mL PBS洗3次以上，置于min/次（去除样品中残留的SDS，TritonX-100，NP-40，Tween-20，甘油等），把beads转移到一个新的EP管中，PBS洗一遍，底用小针扎一个洞直径beads直径），用另一个EP管底下，轻微离心去除残余PBS，现配现用样品加入温度不能超过C，温度过高引起修饰影响鉴定效果于用B. 如果溶液样品不是用8M尿素溶解，请提供IP的详细操作步骤TritonX-100，Tween-20，NP-40，CHAPS，PEG，证明 样品以粉末方式送样：IP洗脱后的样品体积大，蛋白量较多（大于50 ug），可以用TCA（三氯乙酸样品注明样品在用前溶液成分，是否含有TritonX-100，Tween-20，NP-40，CHAPS，PEG，） 以胶样品送样：IP后跑胶后根据条带强弱分成若干组分切下送样分析（胶样品请参考注意事项4）； 全细胞裂解液/组织提取液：（最好用8M尿素裂解细胞，刮下后冰上超声超停，探头温度下降后继续超声不可长时间超声温度超过C，引起蛋白液氮研磨后用。 溶液样品需注明溶剂成 蛋白量尽量估计准确； 翻译后（磷酸化）修饰鉴定： 磷酸化修饰鉴定请注明：A. S+T磷酸化，Y磷酸化或者S+T+Y磷酸化; B.如果只鉴定某个蛋白磷酸化，请注明所要鉴定磷酸化蛋白的基因名字和accession number； 简单样品（胶样品，IP样品等）请提供尽量多的目的蛋白（ 1 ug）； 复杂样品（全细胞裂解液，组织提取液等），请提供至少5mg蛋白； 肽指纹图谱（蛋白测序）： 要求样品纯度高，样品量2ug； 打肽指纹图谱，请提供序列，同时发电子版申请单至wuyy@或xiechch@。 复杂样品定量（label-free iTRAQ标记定量或者双甲基标记定量）浓度后，样品?g送测，剩余样品请自行保存。 按照 带有*号标记的项必须填写。 物种来源：填写所送样品所属物种的学名，例如：所送样品是人源p62，就填写Homo sapiens；在小鼠细胞中转染人源p62，IP p62想要相互作用蛋白时，填写 musculus。 使用中文，超过字母，上的样品名称必须与样品管上一致， 单位名称：校内单位请填写各，校外填写的全称。 8M尿素：尿素溶解在0.1 M pH8.0 Tris缓冲液中 发文章时，如有用到本中心所给的数据，请务必在文中致谢厦门大学生命科学学院分析测试中心（Analysis and Testing Center，School of Life Sciences, Xiamen University），并通知我们，以便我们统计和评估工作成果，进而不断提高服务水平。 所有样品必须注明样品中的蛋白量（多少mg，ug或者ng） 附Commassie法 Commassie法优点是： 1.灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1ug。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。 2.测定快速、简便，只需加一种试剂。