孕烷X 受体对细胞色素P450 CYP3A 基因表达的调控在中药配伍禁忌及中药毒性早期预测中的实践.docVIP

孕烷X 受体对细胞色素P450 CYP3A 基因表达的调控在中药配伍禁忌及中药毒性早期预测中的实践 　　随着中药的使用日益广泛，中药安全性问题与中药不良反应逐渐被人们所关注。中药含有丰富的天然活性成分，具有多种生理功能，但是中药成分和药理作用复杂，长期使用或与化学药物联用时可能对药物代谢酶的表达或活性产生影响，降低药效甚至产生毒性。传统的用于中药配伍禁忌研究以及中药早期毒性预测的常规毒理学实验方法因灵敏度低、周期长、花费多且需消耗大量实验动物等缺陷而难以满足现代药物开发中进行高通量筛选的需求。核受体能结合经药物设计而被修饰的小分子，从而调控相关疾病如糖尿病、代谢性疾病、骨质疏松、癌症等，并参与内源性物质和多种外源性物质，如药物、污染物、致癌物质、杀虫剂或环境化学药品的代谢。其中核受体家族中孕烷X 受体(pregnane X receptor，PXR)作为关键的转录调控因子主要参与药物代谢酶基因表达，改变酶活性，进而降低药效甚至产生毒性。因此，有关基于PXR介导药物代谢酶调控基因表达机制的研究成为了热点，特别其对细胞色素P450 CYP3A(cytochromeP-450 CYP3A ，CYP3A)在药物的减毒、增毒与早期毒性预测方面的作用，更是毒理学和分子药理学研究的重点。 　　1 中药配伍禁忌 　　一段时间以来，由于公众对中药毒性知识匮乏，对中药配伍禁忌更是知之甚微，在临床治疗过程中也对其安全性缺乏有效的监控。近些年，随着国内外中药“药害”事件的不断报道，国内外公众对中药安全性问题开始引起关注。中药配伍禁忌的科学性是现代药性理论争论的焦点之一，然而现阶段对其研究主要停留在文献挖掘、物质基础、生物效应以及毒性考察的阶段，尚未对其内在机制做深层次研究。目前针对中药配伍禁忌的方法与思路主要采用药物代谢动力学方法。作为经典的药物代谢动力学研究方法之一，中药有效成分血药浓度法适用于已明确有效成分或毒性成分的配伍中药，例如黄连解毒散和银杏叶。该法主要包括高效液相色谱法、液-质联用法、气-质联用法、分光光度法、薄层扫描法、毛细管电色谱法以及原子吸收光谱法等。但因为仪器分析法检测出的化学成分只是中药配伍复方中繁多化学成分的一种或几种，而不能全面反映中药配伍所导致的有效成分或毒性成分的变化情况，不能百分百代表复方药物代谢动力学，并且不能检测有效成分不明的中药配伍的药物代谢。生物效应法也是研究中药配伍禁忌的主要方法。中药复方的组成成分主要分为有效成分和毒性成分，通过检测2 类成分的生物活性可以推测出复方整体在体内的大致过程。基于此原理，生物效应法主要分为药理效应法和毒理效应法。药理效应法是通过判断药物的药效强度，以时间-效应关系和剂量-效应关系转换为时间-剂量关系，从而得到药物代谢动力学参数的方法。该法可将中药在体内的动态变化药理指标可逆且定量地反映出来，有利于有效成分尚不明确的中药复方研究。毒理效应法则是将动物急性死亡率和血药浓度法中多点测定原理相结合，测定药物蓄积性的方法，并以急性死亡率为判断指标，即通过设计多组动物不同时间间隔的给药方法，得出体内药物的百分率在不同时间的动态变化，由此推算出药动学参数。该药物动力学研究方法适用于有效成分尚未明确以及成分繁多复杂的中药复方研究，尤其适用于无合适化学定量方法的毒性中药及复方的研究，但因需要大量动物实验，工作量繁重，并不能满足快速评价复方的需求。所以，建立一种基于体外培养的快速筛选评价平台对于中药配伍禁忌研究具有重要意义。 　　2 中药毒性早期预测 　　药物研发是一个高投入、高回报、高难度的产业。在药物临床前阶段，毒性问题是决定研发成败的关键。所以，在研发阶段尽早发现化合物的潜在毒性已成为毒理学研究的热点。动物实验是传统药物毒性预测常用的方法之一，但是采用实验动物病理学及其相关生化指标来判断药物的毒性，存在工作量繁重、耗时长、评价效率低等情况。更重要的是，因为种属差异，从动物实验中获得的数据并不能对人体发生的实际情况进行全面准确地预测。20 世纪90 年代开始，随着现代医学技术的发展，在新药发现阶段，国外制药公司采用毒理学与药动学、药效学、药理学相结合的方法对新化学实体(new chemical entities，NCE)进行筛选和优化。通过综合毒理学、药动学、药效学及药理学的各项结果分析NCE 的开发前景，挑选出候选新药进行结构优化改造和进一步的后续研究。研究主要采取的方法有高通量与高内涵毒性筛选技术方法，例如细胞毒性筛选技术、一般毒性筛选技术、特殊毒性筛选技术等;现代组学技术方法，主要包括基因组学、蛋白质组学和代谢物组学技术，可分别预测药物在基因水平、蛋白质水平和机体代谢这3 个水平的毒性并对毒性作用机制进行深入研究;评价药物的慢性毒性、致癌性和毒性作用机制的“基因敲