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关于柚皮苷通过调控 GSK-3β 表达对糖尿病心肌病大鼠模型的心肌保护作用研究 　　目前有研究显示 , 抑制 GSK-3beta; 通路 , 可有效改善大鼠糖尿病心肌病 (diabetic cardiomyopathy, DCM) 的症状 。近年来已有研究证实柚皮苷可有效防治糖尿病心肌病[2]。本实验以链脲霉素诱导的 DCM 大鼠模型为对象 , 研究柚皮苷是否通过调控GSK-3beta;通路保护DCM心肌细胞。 　　1 材料与方法 　　1. 1 材料 　　1. 1. 1 实验动物 SPF 级Wister 大鼠, 雄性, 体重150~180 g (合格证号SCXK 粤2006-0015), 由南方医科大学实验动物中心提供。 　　1. 1. 2 主要药物与试剂 Naringin 粉沫 ( 广东省梅雁蓝藻公司, 纯度98%);链脲佐菌素(美国SIGMA公司);血糖试纸(强生“中国”医疗器材有限公司 );兔 GSK-3beta;Beta 多克隆抗体(上海恒斐生物科技有限公司);TDZD-8(GSK-3beta;抑制剂) (上海甄准生物科技有限公司)。 　　1. 2 方法 　　1. 2. 1 分组与处理　将60只Wister大鼠随机分为以下四组：对照组、DCM 组、柚皮苷组、TDZD-8 组 , 各 15 只。对照组予普通饲料喂养 , 其余均高糖高脂饲养 6 周 , 在第 6 周时 , 对照组同时采用柠檬酸缓冲液腹腔注射 , 一次性腹腔注射链脲佐菌素 (STZ 60 mg/kg, 临用前用 0.1 mol/L 枸橼酸缓冲液溶解 , pH =4.2) 腹腔注射 ;注射 72 h 后 , 如连续 2 次空腹血糖gt;11.1 mmol/L 视为糖尿病模型成功。随后 6 周 , 柚皮苷组每天予柚皮苷100 mg/(kg·次)灌胃1次, TDZD-8组每天静脉注射 1 次 TDZD-81 mg/(kg·次 ), 对照组及 DCM 组每天予生理盐水灌胃 1 次。对照组继续予普通饲料喂养 , 其余均继续高糖高脂饲养6周, 此时DCM 模型成功。 　　1. 2. 2 左心室功能参数检测 使用 GE Vividi 便携式心脏彩超 ( 探头频率为 12 MHz) 分别于动物造模前及实验第 12周分别行超声心动图检查 , 测量 LVED、LVES、LVPWT 及LVEF。每组数据均取连续3个心动周期的平均值。 　　1. 2. 3 心肌组织 GSK-3beta; 免疫组织化学检测石蜡切片经兔GSK-3beta;Beta多克隆抗体, DAB 显色后, 采用Motic 6.0 数码医学图像分析系统测定阳性光密度值。 　　1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数plusmn;标准差( x-plusmn;s)表示, 采用 t 检验;计数资料以率 (%) 表示 , 采用chi;2检验。Plt;0.05 表示差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2. 1 实验各组大鼠空腹血糖的变化 一次性腹膜腔内注射小剂量链脲佐菌素 72 h 后 , 柚皮苷组及 TDZD-8 组及 DCM组血糖明显升高 , 血糖 gt;11.1 mmol/L, 可认为糖尿病模型造模成功。实验第 12 周 , 柚皮苷组及 TDZD-8 组血糖降低 , 与 DCM 组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)。见表1。 　　2. 2 超声心动图检测结果 DCM 组 12 周时 LVDD、LVDS增大 , LVEF下降, 与动物造模前及对照组比较差异有统计学意义 (Plt;0.05), 提示糖尿病心肌病模型制备成功。柚皮苷组及 TDZD-8 组 LVDD、LVDS、LVEF 等与动物造模前及对照组差异无统计学意义 (Pgt;0.05), 与 DCM 组 12 周时结果比较差异有统计学意义(Plt;0.05)。 　　2. 3 心肌细胞 GSK-3beta; 的表达 采用 CMIAS 系列 Motic.Med6.0 数码医学图象分析系统测量表示 GSK-3beta; 表达水平的阳性目标面光密度值, 柚皮苷组及TDZD-8组GSK-3beta;表达明显低于 DCM 组 , 差异具有统计学意义 (Plt;0.05);DCM组高于对照组 (Plt;0.05)。由此表明 , 柚皮苷及 GSK-3beta; 抑制剂能够抑制 GSK-3beta; 表达。各组 PKC 的阳性目标面密度值的比较见FqE表3。 　　3 讨论 　　糖原合成酶激酶 3beta;(glycogen synthase kinase 3beta;, GSK-3beta;) 是真核细胞内一种