丙型肝炎病毒核心抗原检测技术在安全输血中的应用价值.docVIP

丙型肝炎病毒核心抗原检测技术在安全输血中的应用价值 纪勇平?周斌?麻海勇?孙爱华? 中华实验和临床病毒学杂志, 2015,29(04): 371-373.DOI:10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2015.04.027 摘要 目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫吸附技术(HCV-cAg ELISA)筛查献血员感染HCV的可行性。 方法 将183份抗-HCV阳性、6370份抗-HCV阴性(包括120份伴HBsAg阳性)献血员进行HCV RT-PCR和HCV-cAgELISA检测。 结果 抗-HCV阳性和抗-HCV阴性血清HCV RNA和HCV-cAg检测结果符合率分别为92.34%和99.97%。6370份抗-HCV阴性且不伴HBsAg阳性血清HCV-cAg阳性3份，其中1份HCV RNA阳性。HCV RNA拷贝数的上升与HCV-cAg阳性检出率上升呈正相关。 结论 HCV-cAg ELISA敏感性与HCV RT-PCR类似，具有简便、快速、可靠优点，较适用于安全输血中献血者的血液筛检。 血液传播是丙型肝炎感染的一个最重要途径[1]。我国国家标准规定所有临床使用的血液，全部需经过丙型肝炎病毒(hepattis C virus，HCV)抗体双试剂酶联免疫法(ELISA)检测以确保血液安全，随抗-HCV ELISA诊断试剂从第一代向第三代甚至第四代发展，因漏检导致通过血制品感染HCV感染率下降[2]。但抗-HCV不能作为HCV感染的早期诊断指标，因为HCV感染存在一个HCV感染后尚无抗体出现的窗口期，这一时期抗-HCV ELISA双试剂均无法检出HCV感染的存在[3]，国内外均有因存在窗口期问题而导致HCV输血感染的报道[4,5]。荧光定量PCR(RT-PCR)检测HCV病毒核酸(HCV RNA)可正确反映HCV感染后病毒复制，具有早期、敏感和特异等特点，但该方法在技术和设备上要求较高，且费时、检出率低，难以在常规工作或基层实验室推广[6]。近年来已有国外学者报道血清中HCV核心抗原的酶联免疫吸附技术(HCV-cAgELIsA)检出比HCV RNA平均仅晚1～2 d而且和HCV RNA的动力学变化密切相关，可以作为HCV复制的标志，有利于HCV感染患者的早期发现[7,8,9]。为解决因HCV窗口期造成的输血感染问题，本研究对收集的6553份抗-HCV ELISA不同结果的无偿献血者血标本进行HCV-cAg和HCV RNA检测，评价HCV-cAgELISA在HCV感染早期诊断中的作用。 1.1　检测标本 6553份血标本来自浙江省丽水市中心血站的无偿献血者，其中183份抗-HCV阳性、120份抗-HCV阴性但HBsAg阳性的血标本，2012年1月至2014年6月收集，另有6250份抗-HCV阴性且HBsAg阴性血标本，2014年1月至2014年6月收集。按GB18467－2001《献血者健康检查要求》献血者健康检查要求合格方可献血，为保护献血者隐私，所有样本均采用13位数条码，不出现姓名。 1.2　检测试剂 初检与复检抗-HCV ELISA试剂盒分别购自北京万泰生物药业有限公司和意大利Sorin公司。检测HCV-cAg ELISA试剂盒购自山东莱博公司。按试剂盒操作说明进行检测和结果判断。HCV RNA检测试剂盒由中山大学中山医学院达安基因诊断中心提供，使用仪器为美国ABI公司的7500型荧光定量PCR仪，严格按试剂盒说明书进行操作，病毒载量103拷贝/ml判定HCV RNA定量结果为阴性，103～105拷贝/ml为少量病毒复制，106～107拷贝/ml为中量病毒复制，1.0×108拷贝/ml判定为大量病毒复制。所有试剂均在有效期内使用。 1.3　检测方法 抗-HCV和HCV-cAg检测使用ELISA法，HCV RNA检测用RT-PCR。按试剂盒操作说明进行检测和结果判断。HCV RNA检测阳性判定为HCV确证阳性。 1.4　统计学方法 应用统计软件SPSS 13.0对相关数据进行统计学分析处理，采用χ2检验，P0.05为差异有统计学意义。 2.1　HCV-cAg检测结果 6553份血标本共检测到HCV-cAg阳性57份。其中183份抗-HCV阳性血标本HCV-cAg阳性54份，阳性率29.51%; 120份抗-HCV阴性但HBsAg阳性血标本未检测到HCV-cAg阳性；6250份抗-HCV阴性且不伴HBsAg阳性血标本HCV-cAg阳性3份，阳性率0.05%。 2.2　HCV RNA检测结果 6553份血标本共检测到HCV RNA阳性63份。其中183份抗-HCV阳性血标本HCV RNA阳性62份，阳性率33.87%；120份抗-HCV阴性但HBsAg阳性血标本未检测到HCV-cAg阳