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简述HPLC在生物领域中的简单应用 生科1104 刘坤 191106015 摘要：本文简述了高效液相色谱法在生物领域中的简单应用。详细评述了高效液相色谱法在测定单氰胺中三聚氰胺的含量，黄芪中黄酮类成分和黄芪甲苷的含量，红芪药材中红芪多糖的含量和大豆磷脂酰胆碱含量的测定。HPLC法测定结果灵敏,同时本法测定时间短,操作简便,具有较强的实用性,近年来在生物领域有着广泛的应用。 关键词：HPLC；三聚氰胺；黄酮类；红芪多糖；磷脂酰胆碱 1 前言 高效液相色谱仪与气相色谱仪一样是现代重要的分析手段之一。它具有分析速度快、分离效率高、选择性好和检测灵敏度高的特点,并广泛应用于生命科学、材料科学、环境科学研究等重要领域。HPLC是测定小分子药物纯度的核心技术，它在分析诸如蛋白质类大分子中的作用也在逐渐增加。由于一系列优点，HPLC已经成为一种极具吸引力的分析工具，其优点包括：极快的分离速度（通常每个样品只需几分钟）；高的分辨率；自动化程度高（包括数据分析）；许多成熟的复杂系统可供选择[1]。HPLC可作定性定量分析、纯度分析、结构分析；特别在定量分析和纯度检查方面，在许多领域更是必备的分析方法。例如单氰胺生产中三聚氰胺的含量测定，黄芪中黄酮类成分和黄芪甲苷的含量，红芪药材中红芪多糖的含量和大豆磷脂酰胆碱含量的测定。下面就以上四种物质HPLC测定作简要论述。 2 高效液相色谱法在生物领域中的简单应用 2.1 高效液相色谱法在测定单氰胺生产中的三聚氰胺的含量的应用 单氰胺是由石灰氮（氰胺化钙）和石灰石煅烧后的窑气（二氧化碳）反应后经提纯制得, 三聚氰胺是生产过程中产生的副产物。50%（W/W）单氰胺溶液(单氰胺产品的一种)主要用于医药及农药中间体的制备,还可直接用于部分农作物的催芽促花等方面。固体单氰胺单氰胺产品的另一种用于医药方面。上述应用中, 都对其中的三聚氰胺有严格的要求, 所以单氰胺生产中三聚氰胺的含量应测量并控制。吴明礼[2]采用的色谱柱为日本岛津的L-column-ODS反向柱，流动相为水-氨水-高氯酸缓冲液，检测波长是215nm，平均回收率是98.96%，RSD为0.32%。该方法简单、快速、重现性好。 2.2 高效液相色谱法测定黄芪中黄酮类成分和黄芪甲苷的含量 黄芪为常用补气药,是我国重要的传统药材[3]，黄芪的化学成分众多,主要含有皂苷类、黄酮类、多糖类以及氨基酸类等. 研究表明,黄芪甲苷具有降血压、镇痛、镇惊作用[4],是黄芪中重要生理活性成分,因此黄芪甲苷常作为黄芪药材的定性定量指标[5]。《中国药典》也规定了黄芪中黄芪甲苷的最低限量,黄芪异黄酮也为黄芪的有效成分之一,有抗病毒、抗菌、降血脂、抗氧自由基等作用[6]，封士兰[7]等人对黄芪中黄酮类成分和黄芪甲苷的含量利用HPLC发进行了测定。采用Kromasil ODS - 1 色谱柱,甲醇- 水为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/ min ,检测波长254 nm 测定黄酮类成分的含量;乙腈 - 水为流动相,等度洗脱,流速为1. 0 mL/ min ,检测波长为200 nm 测定黄芪甲苷的含量。黄酮类成分毛蕊异黄酮的线性范围为2.350×10 - 3～4.700×10 - 2μg ，平均回收率为98.34% ,RSD 为2.00% ；芒柄花素线性范围为:2.325×10 - 3～4.650×10 - 2μg ，平均回收率为96.53%，RSD为 1.63%；黄芪甲苷线性范围为1.215～6.075μg ,平均回收率为101.47% ，RSD为2.21%。该方法简便，可靠，准确，具有一定的实用性,可用于黄芪药材质量控制。 2.3 高效液相色谱法测定红芪药材中红芪多糖的含量 红芪为豆科植物多序岩黄芪(Hedysarum poly2botrys Hand2Mazz)的干燥根[8],与黄芪同科异属,临床常与黄芪通用。红芪具有补气固表、利尿排毒、排脓、敛疮生肌补气等作用[8],可治疗慢性肾炎蛋白尿、糖尿病[8]等。多糖的含量测定常用的方法是苯酚-硫酸比色法[9]、硫酸-蒽酮比色法[10]等,这些方法稳定性和选择性都较差,且对仪器的灵敏度和操作者的实验技能要求较高,因此影响实验结果的准确性。李冰[11]等人采用高效液相色谱法测定红芪药材中红芪多糖的含量。红芪多糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖，多糖的平均含量分别为 25.34%、24. 23%、15.08%、17.24%。[色谱条件（Shodex sugar SP0810柱( 300 mm ×8 mm,5μm)；流动相：纯水；柱温：90℃，流速0.85 mL/min，载气流速3.2 L/min，漂移管温度115℃）] 2.4 高效液相色谱法测定大豆磷脂酰胆碱含量 卵磷脂从广义上讲是指包含磷脂酰胆碱