蛋白质等电点测定..docxVIP

蛋白质等电点测定及性质实验一、目的：了解等电点的意义及其与蛋白质分子聚沉能力的关系。初步学会测定蛋白质等电点的基本方法，了解蛋白质的性质。二、原理：固体颗粒在液体中为什么能够带电？当固体与液体接触时，固体可以从溶液中选择性吸附某种离子，也可以是固体分子本身发生电离作用而使离子进入溶液，以致使固液两相分别带有不同符号的电荷，由于电中性的要求，带电表面附近的液体中必有与固体/view/3872524.htm \t _blank表面电荷数量相等但符号相反的多余的反离子。在界面上带电表面和反离子形成了双电层的结构。?在两种不同物质的界面上，正负电荷分别排列成的面层。 对于双电层的具体结构，一百多年来不同学者提出了不同的看法。最早于1879年Helmholz提出平板型模型；1910年Gouy和1913年Chapman修正了平板型模型，提出了扩散双电层模型；后来Stern又提出了Stern模型。根据O.斯特恩的观点，一部分反离子由于电性吸引或非电性的特性吸引作用（例如范德华力）而和表面紧密结合，构成/view/643702.htm \t _blank吸附层（或称紧密层、斯特恩层）。其余的离子则扩散地分布在溶液中，构成双电层的/view/1169706.htm \t _blank扩散层（或称滑移面）。由于带电表面的吸引作用，在/view/1169706.htm \t _blank扩散层中反离子的浓度远大于同号离子。离表面越远，过剩的反离子越少，直至在溶液内部反离子的浓度与同号离子相等。紧密层：溶液中反离子及溶剂分子受到足够大的静电力，范德华力或特性吸附力，而紧密吸附在固体表面上。其余反离子则构成扩散层。滑动面：指固液两相发生相对移动的界面，是凹凸不平的曲面。滑动面至溶液本体间的电势差称为ζ电势。固体颗粒带电量的大小及测量方式？ζ电势只有在固液两相发生相对移动时才能呈现出来。ζ电势的大小由Zeta电位表示，其数值的大小反映了胶粒带电的程度，其数值越高表明胶粒带电越多，扩散层越厚。一般来说，以pH值为横坐标，Zeta电位为纵坐标作图，Zeta电位为零对应的pH值即为等电点。对于蛋白质分子来说：蛋白质分子的大小在/s?wd=%E8%83%B6%E7%B2%92hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank胶粒范围内，约1～100微米。大部分蛋白质分子的表面都有很多亲水集团，这些集团以/s?wd=%E6%B0%A2%E9%94%AEhl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank氢键形式与/s?wd=%E6%B0%B4%E5%88%86%E5%AD%90hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank水分子进行/s?wd=%E6%B0%B4%E5%90%88%E4%BD%9C%E7%94%A8hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank水合作用，使/s?wd=%E6%B0%B4%E5%88%86%E5%AD%90hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank水分子吸附在蛋白质分子表面而形成一层水合膜，具有/s?wd=%E4%BA%B2%E6%B0%B4%E6%80%A7hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank亲水性；又由于蛋白质分子表面的亲水集团都带有电荷，会与极性/s?wd=%E6%B0%B4%E5%88%86%E5%AD%90hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank水分子中的异性电荷吸引形成/s?wd=%E5%8F%8C%E7%94%B5%E5%B1%82hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank双电层。而水合膜和/s?wd=%E5%8F%8C%E7%94%B5%E5%B1%82hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank双电层的存在，使蛋白质的分子与分子之间不会相互凝聚，成为比较稳定的/s?wd=%E8%83%B6%E4%BD%93%E6%BA%B6%E6%B6%B2hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank胶体溶液。如果消除水合膜或/s?wd=%E5%8F%8C%E7%94%B5%E5%B1%82hl_tag=textlinktn=SE_hldp01350_v6v6zkg6 \t _blank双电层其中一个因素