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细菌性应急检验实效性的提高方法探讨 　　摘要：目的 研究如何提高细菌性突发事件的病因诊断实效性。方法 采集某次食物中毒事件中重点样品，使用聚合酶链反应（PCR）双色荧光检测试剂对样品进行检测。结果 本次细菌性应急检验中16h出病因初步诊断结果，40h出阶段检验结果，48h出最终诊断结果。结论 细菌性突发事件应急检验中，采用PCR方法可在较短的时间内诊断出结果，能够有效提高细菌性病因应急检验的实效性。 　　关键词：细菌性应急检验；实效性；聚合酶链反应 　　Abstract：Objective To study how to improve the effectiveness of the etiological diagnosis of bacterial emergencies.Methods The samples were collected on a food poisoning incident，the use of the polymerase chain reaction（PCR）detection of dual color fluorescence detection reagent for sample.Results The bacterial emergency inspection 16 hours out of the initial diagnosis of etiology，40 hour stage test results，48 hours out of the final diagnosis results.Conclusion The bacterial emergency inspection，using the method of PCR can be obtained in a short period of time to diagnosis，can effectively improve the effectiveness of bacterial etiology of emergency test. 　　Key words：Bacterial emergency inspection；Effectiveness；Polymerase chain reaction 　　面对水质污染、食物中毒、传染病等细菌性污染事件，需要及时诊断并提高检验的实效性。在细菌性污染事件中，快速而准确地鉴定细菌种类是提高细菌性污染事件处理效率的关键[1]，但传统的细菌培养鉴定方法所需时间较长，不符合政府要求的快而准的时效性。本研究以某次食物中毒事件为例，探讨提高细菌性应急检验实效性的方法。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 采集某次食物中毒事件中的重点样品，包括32份食物中毒患者肛拭子，9份饮用水水样，10份食物，11份厨工肛拭子，2份冰箱拭子。 　　1.2方法 　　1.2.1试剂与仪器 使用仪器包括荧光定量PCR仪、半自动细菌生化鉴定仪、电热恒温培养箱、生物显微镜及微生物过滤系统；试剂：PCR双色荧光检测试剂（由深圳生科院技术有限公司生产），各种增菌液、生化反应管和选择性培养基（北京陆桥技术有限公司生产）。 　　1.2.2检测方法 根据检验需求，接到标本后，采用一种或多种PCR试剂盒对标准同时处理，肛拭子直接划线接种各种选择性分离平板，置入肉汤中，进行37℃增菌培养，对饮用水样品通过微生物过滤系统进行抽滤、食物样品均质处理，然后再行增菌培养。6h后取出增菌液100μl，离心5min，弃上清液，加入100μl生理盐水，离心2min，弃上清液，加20μl裂解缓冲液，并置100℃金属浴，10min后再次离心2min，保留上清液备用；食物样品加入少量生理盐水中，混合均匀后，离心10min，取上清液高速离心5min，加20μl裂解缓冲液，后续处理同增菌液。按照试剂盒要求，将反应液分组混合均匀，按照22μl进行分装，取经处理后的各类标本上清液3μl加入反应液，并取参比品3μl加入相应的反应液中，同时上机行PCR扩增循环，收集荧光信号，判断结果。 　　2 结果 　　2.1提前纯培养并鉴定 有9份样品在直接划平板培养9h后，长出疑似沙门菌的菌群。将这些可以菌群提前进行半固体琼脂斜面、三糖铁琼脂斜面、蛋白胨水、赖氨酸脱羧酶试验培养基、尿素琼脂、蛋白胨水的接种，并置于37℃进行纯培养。挑选出提示为半固体琼脂斜面培养6h后的纯培养物，行API生化鉴定及血清凝集试验。接到样品后16h，根据血清试验和PCR检测的结果，初步判断食物中毒的致病因子为沙门氏菌。 　　2.2生化鉴定结果 分离平板20h之后，培养出典型沙门氏菌群。接到样品后40h，结合血清学试验、镜检菌体形态、和生化反应的结果