【2017年整理】Pro-inflammatory cytokinechemokine production1.docVIP

呼肠病毒是一种双链RNA病毒nonenveloped是在人口高度流行但产生一些临床症状。大的兴趣，包围了呼肠孤病毒作为一种溶瘤代理，因为它能够感染和诱导肿瘤范围的人类正常细胞死亡，而保留使用。此外呼肠孤病毒已完成了早期临床试验的次数，也是目前在第三阶段的测试设置。初步研究表明，肿瘤特异性溶瘤活性后，激活的Ras信号通路的存在有关，尽管最近的数据表明，易感性呼肠孤病毒感染可能会影响其他复杂的机制 本实验室以前的工作表明，人类黑色素瘤细胞系，以及新鲜手术切除肿瘤，进行呼肠孤病毒引起的一Ras/RalGEF/p38依赖性细胞死亡，而这种死亡是由炎性趋化因子和细胞因子释放的陪同下。的炎症介质的释放以下病毒感染肿瘤细胞已被观察到，如单纯疱疹病毒（HSV）[8]和新城疫病毒（NDV）其他溶瘤病毒。 和不论是自然或通过诱导免疫激活基因直接插入溶瘤，一些病毒，已被证明，以刺激抗肿瘤免疫反应，表明其潜在的免疫治疗和细胞毒性药物。我们以前曾表明，呼肠孤病毒可以通过直接激活施加直流先天刺激NK / T细胞对肿瘤细胞免疫细胞毒性作用，并呼肠孤病毒诱导肿瘤细胞死亡促进先天免疫和适应性抗肿瘤反应在小鼠和人体模型吸系统。然而，由呼肠孤病毒感染的黑色素瘤细胞（病毒本身可迅速清除体内的影响独立）产生的促炎症环境的免疫原性，在发起细胞因子/趋化因子在肿瘤细胞中参与制作的信号通路，还没有得到解决。 趋化因子可以在感染和炎症参与由指挥免疫在宿主反应效应细胞迁移。趋化因子的四个家庭被描述的基础上，保守的半胱氨酸残基的位置。多趋化因子受体可以共享一个共同的，每个趋化因子有可能绑定到几个不同的受体，从而使多种生物的成果后，趋化因子和环境构成的细胞内环境而定。此外，在炎症部位，趋化因子能形成heteromers，有可能诱导协同行动，增强白细胞的迁移和活化。因此，在一个多趋化因子诱导免疫抑制肿瘤微环境有可能诱发免疫效应细胞，以提高治疗效果有力。例如，在小鼠黑色素瘤模型，异位表达和肿瘤细胞的IP- 10分泌增加在肿瘤部位和延长生存依赖NK细胞的NK细胞的数量。数据还显示之间CXCR3表达对T细胞和改进的第三阶段黑色素瘤患者的临床疗效较好的相关性。 目前的研究进一步探讨趋化因子和细胞因子（包括I型干扰素）的reoviral溶瘤诱导的信号通路，为这些炎症介质的产生负责。我们还确定具体的活动性病毒缺乏reoTCM的影响，以排除病毒免疫激活对趋化，NK细胞，DC和CTL的激活和效应功能，直接的后果。 材料和方法细胞培养和呼肠孤病毒Skmel - 28、Mel- 624、Mel- 888和MeWo细胞生长在Dulbecco的改良Eagle培养基（DMEM培养基）（Invitrogen公司，佩斯利，英国），加入10％（体积/ V）的胎牛血清（FCS）的（BioSera，帕特里克下，英国）和1％（v / V）L -谷氨酰胺（Sigma Aldrich公司）。 获得外周血液单个核细胞（PBMC），经当地伦理学批准，采用Ficoll - Hypaque密度梯度离心从健康献血者棕黄色大衣。人类骨髓未成熟树突状细胞（DC）产生的人类PBMC经MACS CD14 +选择（Miltenyi公司生物技术）或者单核细胞粘附，如前所述。 单核细胞培养在RPMI 1640培养基中，加入10％胎牛血清，1％L -谷氨酰胺（完整的媒体），800 U / ml的GM - CSF的和500 U / ml的IL - 4的，培养5天。 使用MACS negative depletion kits从人类PBMC中分离得到NK细胞（90％纯度） 。NK细胞常规培养于DMEM，10％（体积/ V）的人AB血清、5％（体积/ V）的胎牛血清和1％（v / V选择）L -谷氨酰胺的。用病毒感染Mel- 888细胞（moi 0.1），以如下方法详细分析得知，14天后产生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。 对于趋化实验，NK细胞、DC和CTL的悬浮于RPMI/0.5％的人AB / 1 LGlutamine 中。所有细胞株生长在37℃，含5％二氧化碳条件下，并定期检查，证实无支原体存在。另有说明黑色素瘤细胞用2.5mM 2 -氨基嘌呤（2 -美联社）或50μM的咖啡酸苯酯（CAPE）处理1小时之前，期间，与呼肠孤病毒治疗。无论是2 - AP，还是CAPE，都没有在使用的剂量凯普直接黑色素瘤细胞毒性（数据未显 示）。迪林呼肠孤病毒3型菌株生物技术公司是由Oncolytics提供的病毒滴度测定用标准的牌匾L929细胞检测。 酶联免疫吸附试验，点阵仪和流式细胞仪 使用配对抗体检测IL - 8。IFN-?的检测使用IFN-? kit。趋化因子和IP- 10的检测采用点阵仪检测技术（Biosource）。为了评估NK细胞表型的活化作用，以CD