【2017年整理】Bt乳剂“产气”试验报告.docVIP

PAGE PAGE 12 Bt乳剂“产气”试验报告 一、宗旨 Bt乳剂系我厂一九九一年引进中国科学院武汉病毒研究所的生产技术，共同开发的一个产品，一九九二年生产的产品到目前为止，未出现任何包装质量事故，一九九三年生产的产品（93年4月份生产）从仓储的几个月来看，出现了大批量的胀瓶、炸瓶等质量事故，为解决和克服这一重大问题，特作一系列试验。 二、原理 Bt在其发酵过程中，除产生代谢产物——伴孢晶体和芽孢外，还含有大量的发酵培养荃残渣，特别是残余的糖类和氮类，而这些培养基残渣又为一些厌氧的微生物的生存提供了良好的环境，这些厌氧微生物在其体内继续发酵，产生一些代谢气体，在密闭的空间内不得及时得到排出，而致使包装瓶胀甚至破裂。 为防止这些微生物在产品中发酵，我们利用外界因素来干扰和破坏这些微生物的生命活动，抑制其进一步生长发育，而达到实验之目的，通常影响微生物正常生理活动的主要因素有温度、PH、溶解氧、营养、渗透压、防腐剂等。其中，在密闭的环境中起主要作用的又是温度、PH、渗透及防腐剂等。 三、试验材料 新鲜发酵液 若干 包装瓶（100ml） 若干（用100ml井冈素浓缩液瓶代替） 试管（250×200） 若干 石蕊试纸（红） 若干 醋酸铅试纸 若干 PH精密试纸 若干 米 尺 1根 盐 酸 若干 盐 若干 苯甲酸钠 若干 石灰水（澄清） 若干 显微镜 四、试验过程 （一）将新鲜发酵液经双层纱布过滤，在滤液中渗入少量的浓缩液，使滤液含菌数在50～60亿芽孢/毫升。 （二）将滤液按附表一进行依桨处理后，每瓶装量100ml，密封（图一），同时相应地装入少许滤液于试管（图二），按附表二要求作产氨及H2S气体试验。 （三）将（二）置于38～40℃恒温箱内作加速试验。 （四）将试验结果记录于附表一、二中。 五、结果与分析 从一系列实验结果来看，有产气的，有不产气的（图三），其中以编号“13～15”试样不产气，即在一定的酸碱度，渗透压及防腐剂的条件下不产气，而其余处理的均产气或产气情况不明显，为了得出正确的结论，进一步作产品内部成分的分析。 （一）显微镜涂片检查： 在处理的一系列样品中，每组任抽一瓶样品作涂片检查（附表Ⅲ结果表明：‘3、6、8、11’中含有不同程度的异染物质，从而初步确定产气的机理是由于厌氧微生物的活动引起。 （二）生化分析 微生物赖以生存的环境主要靠营养。因此，将（一）中的5瓶样品进行糖、氮生化分析（附表Ⅲ）结果表明： （1）从糖类消耗情况来看： 1411863 （2）从NH2－N的利用情况来看： 1411863 由此确定从3、6、8、11、14微生物活动的顺序依次减弱的。 （三）气体成分分析： 通过生化分析得知营养成分消耗中有厌氧微生物的活动，究竟活动的程度如何，还需进行气体成分的分析才能知道营养物质代谢的可能途径。具体试验方案如下： （1）利用醋酸铅试纸及红色石蕊试纸测定H2S及NH3的产生从图4中可以看出，“1～12”中均有不同程度的使醋酸铅试纸变黑色，及红色石蕊试纸变兰色，从而确定系列样品中产生了H2S及NH3。反应式如下： pb(Ac)2＋H2S＝PbS↓（黑色）＋2HAc （2）CO2气体的检验： 在方案（1）中确定了H2S的存在，再按下列方案检验CO2的存在用一带针头的乳胶管将气体从产生的瓶中导出，按下列程序进行试验： 证明无SO2 | 不退色 ? ①| 品红溶液 ? 气 体 ②| 清石灰水 白色浑浊 | 可能有CO2、H2S等气体 |继续通入气体 白色浑浊溶解，又转清 | 可能有CO2、H2S 反应式：CO2＋Ca(OH)2＝CaCO3↓（白色）＋H2O 由系列试验得知，气体成分中含有H2S、NH3，可能还含有CO2，以及H2、CH4、C2H2、C2H4等气体，但鉴于我厂目前实验设备的局限性，不可能进一步的化学鉴定。 （四）酸碱度变化 在未经酸碱处理的样品中，用精密试纸测定样品PH值，并变化情况如下：开始略有下降的趋势，然后再慢慢稍有回升及至平稳，图示如下： PH 8 6 4 2 时间（天） 0 2 4 6 10 12 时间（天） PH值变化示意图 说明厌氧微生物开始利用糖类产生一些酸类物质，使PH值下降，然后酸类物质在微生物本身的酶系催化作用下又转变成其他物质，这种物质可能为中性物质。使PH值慢慢回升。 （五）综合分析 从上述分析结果综合来看，厌氧微生物利用残余的培养基进行发酵产生一些气体，据我们分析可能是产气气体杆菌活动所致，使主要代谢途径可能有： （1）糖代谢： 产气杆菌具有δ－乙酰乳酸合酶系，能利用葡萄糖产生3－羟丁酮（乙酰甲基甲醇），从而进一步产生